تولید رده نوترکیب HEK293T با بیش- بیانی پایدار miR-1‎ به عنوان مدل زیستی برای مطالعات قلبی

 القای مصنوعی بیش- بیان miRNA راهکار مناسبی برای القای موثرتر تمایز سلولی است. نقش موثر miR-1 در تکوین و تمایز سلول های قلبی گزارش شده است. لنتی ویروس یک ناقل کارآمد برای تهیه رده های سلولی پایدار است. هدف پژوهش حاضر تولید رده سلولی با بیش- بیان پایدار miR-1 برای ایجاد یک مدل زیستی برای مطالعات قلبی بود. در پژوهش تجربی حاضر، سلول های HEK 293T در محیط کشت DMEM به همراه سرم جنین گاوی (FBS) 10% و ال- گلوتامین 2میلی مولار و پنی سیلین- استرپتومایسین 1X در محیط انکوباتور کشت داده شدند. پس از کلون کردن ژن miR-1، کلون های نوترکیب انتخاب شدند و حضور قطعه ژنی در وکتور نوترکیب با توالی یابی تایید شد. وکتور حامل miR-1 به همراه وکتورهای کمکی در سلولHEK293T به صورت ویروس نوترکیب بسته بندی شد. تراآلایی سلول های HEK293T با ویروس نوترکیب برای تولید رده پایدار انجام شد. سپس کارآیی تراآلایی و رقت موثر ویروس با نشانگر GFP سنجش شد. تغییرات بیان miR-1 با روش qPCR بررسی شد. تحلیل داده ها از طریق بررسی مقایسه ای چرخه آستانه و روش Pfaffl انجام گرفت. بیشترین میزان بیان GFP مربوط به سلول های آلوده شده با رقت 150میکرومولار بود. نشانگر فلورسنت GFP موجب تسهیل فرآیند بهینه سازی و تخلیص سلول های نوترکیب شد. در ارزیابی qPCR، بیان miR-1 در سلول های تراآلایی شده در مقایسه با سلول های گروه کنترل افزایش قابل ملاحظه ای داشت. رده سلولی پایدار نوترکیب HEK293T بیش- بیان کننده miR-1 در لنتی ویروس، به عنوان مدل زیستی مناسب برای بررسی فرآیندهای تکامل و تکوین قلب است.