پایش سمیت سرب به وسیله زیست حسگر لوسیفراز رده سلولی Huh7-1x-ARE-luc

 تجمع رادیکال های آزاد در بدن با ایجاد استرس اکسیداتیو منجر به تخریب پلیمرهای زیستی می شود. به دلیل ورود فلزات سنگین به محیط های آبی و خاکی، یافتن روش های کارآمد برای شناسایی و اندازه گیری میزان فلزات سنگین لازم است. زیست حسگرهای سلولی می توانند در حضور یک محرک از جمله فلزات سنگین، سیگنالی قابل اندازه گیری تولید کنند. در این تحقیق رده سلولی Huh7-1x-ARE-luc تحت کنترل پروموتر حساس به حضور اکسیدان ها با هدف پایش سرب استفاده شد و کارآیی آن در سنجش سمیت این مواد به واسطه آرمایش های لوسیفراز و Real time-PCR بررسی شد. در این مطالعه تجربی، بعد از ترنسفکشن وکتور نوترکیب سنجش فعالیت ژن لوسیفراز در نمونه های تیمارشده با سرب انجام شد. تعدادی از کلون های تاییدشده با فنوتیپ پایدار بعد از پاساژ پنجم برای بررسی بیان ژن لوسیفراز در غلظت های صفر تا 80ماکرومولار از سرب بررسی شدند. سپس قابلیت مهارکنندگی به روش assay MTT و تغییرات بیان ژن های مسیر اکسیداتیو توسط Real time-PCR بررسی شد. تحلیل های آماری با روش ∆Ct و با استفاده از نرم افزار graphpad prism 6 انجام شد. میزان بیان ژن گزارشگر همراه با افزایش ماده اکسیداتیو افزایش یافت. کاهش بیان ژن گزارشگر بعد از غلظت 30ماکرومولار سرب قابل مشاهده بود. غلظت 35ماکرومولار سرب، متابولیسم 50% سلول ها را مهار کرد. بیان ژن های مسیر آنتی اکسیدانی در سلول های تیمارشده با سرب 30ماکرومولار نسبت به ژن کنترل، افزایش معنی داری داشت. زیست حسگر تهیه شده از رده سلولی نوترکیب Huh7-1x-ARE-luc حامل ژن گزارشگر می تواند وسیله مناسب و کارآمدی برای سنجش ترکیبات اکسیداتیو همچون فلزات سنگینی چون سرب باشد.