ساب کلونینگ ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز موش سوری در وکتور لنتی ویرال و انتقال آن به رده سلولی HEK

ژن درمانی یکی از مهم ترین شیوه های تحقیقات بالینی است که ارایه دهنده روش های جدیدی برای درمان نقص های ژنتیکی می باشد. نقص ژنتیکی آنزیم گلوکوسربروزیداز (Gba) عامل بیماری گوشه بیش از بقیه بیماری ها در ژن درمانی مورد توجه قرار گرفته است. هدف از انجام این پروژه کلونینگ و انتقال ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز توسط لنتی ویرال وکتور ارتقا یافته به رده سلول های HEK می باشد.
مطالعه به روش تجربی و به منظور تولید و تکثیر cDNA ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز به کمک پرایمرهای اختصاصی به روش PCR انجام گرفت و در وکتور غیر بیان کننده، کلون و ترادف یابی گردید. سپس ژن نوترکیب را در لنتی ویرال وکتور ارتقایافته دارای ژن گزارش گر GFP ساب کلون شد. پس از کشت سلول های HEK وکتور نوترکیب لنتی ویرال به آنها منتقل شد و انتقال ژن Gba با استفاده از ژن گزارشگر GFP بررسی گردید.
تکثیر و کلونینگ ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز با استفاده از آنزیم های محدودگر تایید گردید. ترادف های ژن Gba با ترادف های گزارش شده آن کاملا تطبیق داشت. ساب کلونینگ ژن Gba در وکتور لنتی ویرال با استفاده از آنزیم های محدود کننده مختلف تایید شد. انتقال ژن نوترکیب Gba توسط بیان ژن گزارش گر با استفاده از پروتئین های فلورسنتی تایید گردید.
در این تحقیق بخشی از فرآیند پروتکل ژن درمانی با انتقال ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز موش به سلول های HEK توسط وکتور لنتی ویرال انجام گرفت.