جداسازی ترادف نشانه زیرواحد کوچک آنزیم روبیسکو از گیاه کلزا و ارزیابی عملکرد آن در گیاه تراریخت توتون

• امیری نود یجه علیرضا، د انش آموخته علوم سلولی و مولکولی - پژوهشگاه ملی مهند سی ژنتیک و زیست فناوری تهران و دانشگاه خاتم - تهران • سلمانیان علی هاتف، عضو هیات علمی پژوهشگاه ملی مهند سی ژنتیک وزیست فناوری- تهران(نویسند ه مسئول)• موسوی امیر، عضو هیات علمی پژوهشگاه ملی مهند سی ژنتیک وزیست فناوری- تهرانتاریخ دریافت: ارد یبهشت ماه1384 تاریخ پذیرش: آذرماه 1385Email: salman@nigeb.ac.irچکیدهروبیسکو، آنزیم کلید ی واکنش های تاریکی فتوسنتز در استرومای کلروپلاست است. زیر واحد کوچک این آنزیم که توسط ژنوم هسته کنترل می شود، پس از بیان در سیتوپلاسم توسط پپتید نشانه اختصاصی به کلروپلاست هد فمند می گردد. به منظور به کارگیری این تراد ف نشانه در هد فمند کردن محصولات دیگر به داخل کلروپلاست، ابتدا DNA ژنومی از برگ گیاه کلزا(.Brassica napus L) استخراج گردید. تکثیر تراد ف نشانه مورد نظر با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز و با استفاده از آغازگرهای اختصاصی مربوط به ژن کد کننده پپتید نشانه انجام شد. قطعه تکثیر شده به طول 170bp د رپلاسمید عمومی 18 pUC و سپس در پلاسمید بیانی گیاه 121 pBIکلون شد. در مرحله بعد انتقال ژن به گیاه توتون با استفاده از Agrobacterium tumefaciens سویه 4404 LBA انجام گرفت. انتخاب اولیه سلول های تراریخت گیاه توتون بر روی محیط حاوی کانامایسین صورت پذیرفت. واکنش زنجیره ای پلی مراز با استفاده از آغازگر های اختصاصی و نیز رنگ آمیزی برگ ها با محلول GUS تراریختی احتمالی گیاهان را اثبات کرد. در عین حال، رنگ آمیزی GUS بر روی کلروپلاست های جد ا شده از گیاهان تراریخت و مقایسه آن با کلروپلاست های گیاهان شاهد نشان د اد که محصول ژن GUS به خوبی به کلروپلاستها هد فمند شده است. نتایج این بررسی عملکرد عمومی تراد ف نشانه زیرواحد کوچک روبیسکو گیاه از کلزا را برای انتقال پروتئین های هترولوگ (نظیر GUS) و در میزبان هترولوگ (نظیر توتون) نشان می د هد.