طراحی، ساخت و ارزیابی ایمنی زایی سازه های DNA پلی توپ با استفاده از اپی توپ های غالب ویروس هپاتیت سی در موش BALAB/c

طراحی، ساخت و ارزیابی ایمنی زایی سازه های DNA پلی توپ با استفاده از اپی توپ های غالب ویروس هپاتیت سی در موش BALB/c چهار اپی توپ CTL وابسته به HLA-A2 و H-2d انتخاب و بر اساس الگوریتم های شناسایی اپی توپ و برش پروتئازوم در سه ترتیب مختلف طراحی شدند. توالی های نوکلئوتیدی مربوطه با روش SOEing PCR ساخته شده و به صورت متصل یا غیرمتصل به ژن آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت بی (HBsAg-S) در پلاسمید pcDNA3.1 کلون شدند. به دنبال تهیه آنتی سرم پلی کلونال بیان و ترشح پلی توپ ها در سلول های Cos-7 با روش های ایمونوفلورسانس، وسترن بلات، دات بلات، الایزا و RT-PCR بررسی و ایمنی زایی سازه ها با آزمون ازدیاد حساسیت تاخیری (Delayed-type Hypersensitivity; DTH) در موش BALB/cارزیابی شد.
پپتیدهای پلی توپ حاصل از بیان پلاسمیدهای ساخته شده به واسطه طراحی in silico و تمهیدات به کار رفته، با تکنیک های معمول در محیط آزمایشگاه به طور کامل شناسایی شده و ترشح ذرات هیبرید با HBsAg-S به محیط کشت (به میزان 30 درصد) نشان داده شد. هم چنین کلیه پلاسمیدها قادر به تحریک کارآمد پاسخ DTH بودند که در این میان سازه های هیبرید با HBsAg-S اثر فزاینده معنی داری را بر پاسخ ایجاد شده علیه اپی توپ های موشی نشان دادند.
سازه های پلی توپ ساخته شده به خوبی بیان و پردازش شده و از کارایی اولیه لازم به منظور بررسی بیشتر ایمنی زائی در موش تراریخته برخوردار می باشد.