بیان استرپتوکیناز نوترکیب استرپتوکک گروهA در باکتری اشرشیاکلی
استرپتوکیناز A از جمله پروتئین های ترشحی استرپتوکک پیوژن است که قدرت آنتی ژنیک دارد. از این پروتئین می توان جهت سیال کردن چرک در ذات الریه و ورم مفصلی چرکی و همچنین به عنوان آنتی ژن برای تشخیص عفونت های استرپتوککی گروه A استفاده کرد.
مطالعه به منظور تولید استرپتوکیناز استرپتوکک گروه A نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی انجام شد.
در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختصاصی و استفاده از روش PCR، ژن استرپتوکیناز A از استرپتوکک پیوژن تکثیر و در ناقل پلاسمیدی pET32a جهت بیان کلون شد. پلاسمید SKA - pET32a وارد اشریشیاکلی سویه BL21-DE3-plySs شد. تولید پروتئین با القا توسط IPTG و بهینه سازی شرایط انجام شد. پروتئین نوترکیب با کیت Ni-NTA خالص و مقدار پروتئین نوترکیب تولید شده با روش برادفورد اندازه گیری شد. آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتئین نوترکیب انجام شد. ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده با روش سنگر تعیین شد.
ترادف ژن تکثیر شده که در پلاسمید pTZ57R/T کلون شده بود با ترادف ثبت شده برای ژن استرپتوکیناز A در بانک ژن، یکسان بود. مقدار پروتئین تولید شده با استفاده از روش برادفورد 3 میلی گرم بر میلی لیتر به دست آمد. پروتئین استرپتوکیناز نوترکیب تولید شده با سرم موش واجد آنتی استرپتوکیناز A واکنش داد. پروتئین تولید شده وزنی در حدود 67 کیلو دالتون داشت و خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ کرد.
بیان پروتئین نوترکیب استرپتوکیناز A در میزبان اشرشیاکلی نیز امکان پذیر است. بنابراین می توان از آن در تشخیص بیماران مبتلا به عفونت های استرپتوککی گروه A به جای آزمایش های آنتی استرپتولایزین O (ASO) و استرپتولایزین O (SLO) استفاده کرد.
- حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران میشود.
- پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانههای چاپی و دیجیتال را به کاربر نمیدهد.