شناسایی Brucella.spp در نمونه های شیر خام و پنیر به وسیله تکنیک Hemi Nested PCR

بروسلا یک کوکوباسیل گرم منفی می باشد که میزبانهای آن شامل انسان، گاو، بز و گوسفند می باشد. بروسلا از طریق شیر و فراورده های لبنی انتقال یافته و در انسان سبب ایجاد تب مالت می شود. روش های سرولوژیک تشخیص بروسلا از حساسیت و دقت کافی برخوردار نبوده و دارای نتایج مثبت و منفی کاذب فراوانی می باشند. هدف از این مطالعه بررسی کارایی تکنیک همی نستد PCR جهت تشخیص بروسلا در نمونه های شیر و پنیر می باشد.
در این مطالعه 15 نمونه شیر خام، 15 نمونه پنیر پاستوریزه و 15 نمونه پنیر سنتی از سطح استان تهران جمع آوری گردید. DNAی نمونه ها به وسیله کیت DNP استخراج گردید. پس از بهینه نمودن راند اول و دوم تست PCR، حساسیت و اختصاصیت آن مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس تمامی نمونه ها به وسیله تست PCR بهینه شده مورد بررسی قرار گرفتند.
محصول آمپلیکون تکثیر یافته در محصول اول PCR، 443 جفت باز و در محصول دوم 225 جفت باز بود. حساسیت تست PCR بهینه شده تا 100 پارتیکل تعیین گردید. از 15 نمونه شیر خام،10 نمونه PCR مثبت، از 15 نمونه پنیر پاستوریزه 6 نمونه و از 15 نمونه پنیر سنتی 8 نمونه PCR مثبت شدند.
با توجه به نتایج بدست آمده، تست PCR مورد بررسی در این مطالعه از حساسیت و دقت بسیار بالایی نسبت به روش های متواتر برخوردار بوده، همچنین به نظر می رسد ضرورت استفاده از روش های مولکولی به عنوان یک روش تاییدی جهت تشخیص بروسلا در کنار روش های متداول غربالگری اجتناب ناپذیر می باشد.