طراحی، ساخت، آنالیز تعیین توالی و بررسی بیوانفورماتیکی کاست ژنیRTB-ipaD: راهی نوین در جهت تولید واکسن شیگلوزیس

شیگلا شایع ترین عامل اسهال می باشد. آنتی ژن پلاسمیدی IpaD برای تهاجم باکتری به درون سلول میزبان ضروری می باشد. یکی از چالش ها درباره واکسن مخاطی علیه شیگلا بر پایه پروتئین IpaD قدرت پایین آن می باشد. به نظر می رسد که با متصل کردن IpaD به یک ناقل و ادجوانت مناسب همچون زیر واحد B سم ریسین، می توان پروتئین IpaD را بسیار ایمنوژنیک نمود. این مطالعه به منظور تولید وکتور بیانی نوترکیب دارای کاست ژنی RTB-ipaD، آنالیز تعیین توالی و بررسی بیوانفورماتیکی آن انجام گرفته است.
در این مطالعه ژن های RTB و (163-483) ipaD در وکتور pGEM-T همسانه سازی شدند. ژن ipaD به روش برش آنزیمی با ژن RTB به همراه لینکر کد کننده GPGP در وکتور pGEM متصل شد. سپس قطعه کایمریک RTB-ipaD در وکتور بیانی pET28a(+) زیر همسانه سازی گردید. در پایان آنالیز تعیین توالی و بررسی بیوانفورماتیکی کاست ژنی انجام گرفت.
صحت ساخت کاست ژنی RTB-ipaD در وکتور بیانی pET28a(+) با واکنش PCR و هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. نتایج حاصل از تعیین توالی کاست ژنی مطابق با توالی ذخیره شده در بانک ژنی بود. مطالعات بیوانفورماتیکی بر مبنای شاخص سازگاری کدون نشان داد این کاست قابلیت بیان در گیاه ترانس ژن و برخی سویه های باکتری اشرشیاکلی را دارد.
اتصال RTB به عنوان ناقل و ادجوانت به آنتی ژن IpaD رویکردی نوین و مطلوب در جهت تولید واکسن مخاطی شیگلوزیس می باشد