بیان پروتئین M2 ویروس آنفلوانزای انسانی H1N1 در باکتری اشریشیا کلی

پروتئین M2 که یک پروتئین هوموتترامر متصل به غشا با پیوند دی سولفیدی می باشد، در میان همه ی ویروس های آنفلوانزای A به طور کامل حفاظت شده است. به همین دلیل هدف مناسبی برای توسعه ی واکسن آنفلوانزا با محافظت وسیع الطیف می باشد. در این مطالعه پروتئین M2 ویروس آنفلوانزای A در سیستم پروکاریوتی بیان شد.

ژن پروتئین M2 ویروس آنفلوانزا [A/NewCaledonia/20/99 (H1N1)] پس از تکثیر به روش PCR (Polymerase chain reaction) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و هضم آنزیمی، در وکتور بیانی پروکاریوتی pQE30 جای سازی گردید. پلاسمید نوترکیب pQE30-M2 به سلول مستعد شده E.coli سویه ی M15 منتقل شد و سلول ها در محیط LB مایع واجد آمپی سیلین و کانامایسین بعد از القا با IPTG (Isopropyl thiogalactoside) به صورت کشت شبانه رشد کردند. بیان پروتئین M2 به وسیله ی الکتروفورز روی ژل آکریل آمید و سپس Western blot تایید شد.

نتایج کلونی PCR و هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که ژن M2 در وکتور pQE30 به طور صحیح و در قاب خواندنی دنباله ی هیستیدینی کلون شد و تولید پروتئین نوترکیب با استفاده از آنتی بادی اختصاصی ضد پروتئین M2 به روش Western blot تایید گردید.

آزمایشات نشان داد که واکسن های بر پایه ی M2 باعث القای ایمنی وسیع الطیف می شوند و می توانند حیوانات را در برابر چالش کشنده تحت تیپ های چندگانه ی ویروس، محافظت نماید. بنابراین پروتئین M2 پس از تخلیص می تواند به عنوان یک کاندید واکسن در نظر گرفته شود و در مطالعات آینده همراه با ادجوانت های مختلف در مدل های حیوانی مورد ارزیابی قرار گیرد.