ساخت وکتور بیانی pcDNA3.1-FSHβ به منظور انتقال ژن زیر واحد FSHβ به سلول لاین پستان داران

هورمون محرک فولیکولی (Follicle stimulating hormone، FSH)، یکی از هورمون های گلیکوپروتئینی هیپوفیز است که از دو زیر واحد آلفا و بتا تشکیل شده است. زیرواحد بتا حاوی 111 اسیدآمینه و یک سیگنال پپتید 18 اسیدآمینه ای و مسئول فعالیت بیولوژیکی هورمون می باشد. هدف از این مطالعه ساخت وکتور بیانی pcDNA3.1-FSHβ به منظور انتقال ژن زیر واحد FSHβ به سلول لاین پستانداران بود.

ابتدا یک جفت پرایمر برای ساب کلونینگ زنجیره β از T.vector طراحی گردید تا علاوه بر داشتن نواحی ابتدا و انتهای ژن زنجیره β دارای محل اثر آنزیم های HindΙΙΙ و EcoRΙ باشد. زنجیره بتای آمپلیفیه شده از ناحیه جای گاه دو آنزیم فوق در پلاسمید pcDNA3.1 کلون و پلاسمید نوترکیب به وسیله ترانسفورماسیون وارد سلول E.coli گردید. کلون های تشکیل شده به وسیله PCR مجدد بررسی و پلاسمید تعدادی از کلون های مثبت تخلیص گردید. صحت پلاسمیدهای خالص شده به دو روش هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید گردید.

آنالیز آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که پلاسمید pcDNA3.1-F390β دارای ساختار پلاسمیدی و توالی ژنی صحیح است و تطابق کامل با ژن بتای هورمون FSH گزارش شده در GenBank دارد.

این پلاسمید نوترکیب به لحاظ ساختاری صحیح و جهت انتقال ژن به سلول کشت پستان داران و ارزیابی بیان مناسب می باشد.