استفاده از روش تراریزش توام برای انتقال ژن کولین اکسیداز به برنج

در این پژوهش به منظور تولید گیاه برنج تراریخته با ژن کولین اکسیداز با قابلیت حذف ژن نشانگر انتخابی، دو پلاسمید بیانی موسوم به pABRII-Chl  (ژن کولین اکسیداز حاوی پپتید راهنما برای تظاهر ژن در کلروپلاست) و pABRII-Cyt (بدون پپتید راهنما برای تظاهر ژن در سیتوپلاست) ساخته شد و سپس با استفاده از روش تراریزش توام، به همراه پلاسمید pTRA132 حامل ژن مقاومت به هیگرومایسین(hph) ، به کالوس های جنین زایی که از ناحیه اسکوتلوم بذور رسیده رقم هاشمی منشا گرفته بودند، به روش ریزپرتابی منتقل شدند. سلول های تراریخته احتمالی از بافت های بمباران شده پس از 3 دوره گزینش در محیط کالو سزایN6 حاوی هیگرومایسین ب گزینش شدند. به صورتی که غلظت آنتی بیوتیک از 60 میلی گرم در لیتر به80 میلی گرم در لیتر افزایش یافت.گیاهان برنج تراریخته ی احتمالی به روش آنالیز زنجیره ای پلیمراز، آنالیز سادرن و RT-PCR مورد بررسی قرار گرفتند و حضور ژن و بروز آن مورد تایید قرار گرفت. فراوانی قابل قبول گیاهان تراریخته حاصل از روش تراریزش همزمان در این پژوهش نشان داد که روش مورد استفاده یک روش تکرار پذیر و نسبتا کارا برای انتقال پایدار ژن های مفید و تولید گیاهان تراریخته عاری از ژن انتخابگر در مقیاس وسیع است. انتقال ژن مقاومت به آنتی بیوتیک در ساختار جداگانه امکان جداسازی این ژن از محصول نهایی را در نتیجه تفرق فراهم می آورد که از جنبه ایمنی زیستی حایز اهمیت است.