ارزیابی فراوانی زیرگونه های ژیاردیالامبلیا به روش PCR-RFLP در نمونه های مدفوع کودکان بستری شده در مرکز آموزش و درمانی مطهری شهر ارومیه

ژیاردیا لامبلیا یکی از شایع ترین پروتوزواهای تاژکدار روده ای است که گروه وسیعی از میزبانان مهره دار را آلوده می کند. ژیاردیا یکی از معمول ترین پاتوژن های روده ای در بچه هاست که باعث اختلالات شدید روده ای و تاخیر در رشد می شود.این مطالعه برای تعیین زیرگونه های ژیاردیالامبلیا به وسیله روش PCR-RFLP با استفاده از ناحیه گلوتامات دهیدروژناز از کودکان بستری شده در بیمارستان مطهری ارومیه، آذربایجان غربی در ایران انجام گرفت.
در این مطالعه، 34 نمونه مدفوع از کودکان بستری شده در بیمارستان مطهری ارومیه که با استفاده از میکروسکوپ نوری دارای کیست های ژیاردیا بودند جمع آوری شد. کیست ها به طور نسبی به وسیله روش گرادیان سوکروز تغلیظ و سپس جهت حذف موثر مهار کننده های PCR، به وسیله آب مقطر استریل شستشو داده شد. DNA ژنومیک انگل ژیاردیا به وسیله سیکل های انجماد و ذوب کردن و سپس روش فنل کلروفرم استخراج شد. برای تمایز زیرگونه های A، B که در انسان ها یافت می شود یک آزمایش PCR-RFLP تک مرحله ای انجام گرفت. در این روش یک قطعه ای به اندازه432 bp مورد انتظار بود، تکثیر یافت و سپس برای تعیین زیرگروه های انگل، از آنزیم های محدود کننده اختصاصی RsaI، BspL1 استفاده شد.
از 720 نمونه بررسی شده میکروسکوپی، به طور کلی 34 نمونه از نظر وجود کیست ژیاردیا مثبت بودند که میزان شیوع انگل 72/4درصد گزارش شد.آزمایش PCR-RFLP بر روی این نمونه ها آشکار کرد که 28 نمونه (3/93%) دارای ژنوتایپ BIII و دو نمونه (7/6%) متعلق به زیر گروه BIV می باشد.
PCR-RFLP یک روش قوی و قابل اعتمادی است که ما را در تعیین موثر ژنوتایپ در بین زیرگونه های ژیاردیا با استفاده از ژن ناحیه گلوتامات دهیدروژناز میسر ساخته و شناسایی وجود ژنوتایپ های مخلوط را ممکن می سازد. بر اساس نتایج یک منشا حیوانی از عفونت پیشنهاد می شود.