بررسی وارونگی اینترون 22 نوع I و II ژن فاکتور هشت انعقادی در بیماران هموفیلی A شدید با استفاده از روش IS-PCR

هموفیلی A یک اختلال خونریزی دهنده وابسته به جنس مغلوب است. این بیماری به علت وقوع جهش در ژن فاکتور هشت ایجاد می شود. وارونگی اینترون 22، شایع ترین جهش مسبب ایجاد هموفیلی A شدید بوده که با استفاده از روش های Southern blot و واکنش زنجیره ای پلی مراز، قابل تشخیص است. این مطالعه با هدف تعیین وارونگی اینترون 22 نوع I و نوع II، در بیماران هموفیلی A شدید با استفاده از روش IS-PCR انجام شد.
این مطالعه روی 30 بیمار هموفیلی A با کمتر از 1% سطح نرمال فعالیت فاکتور هشت انجام شد. بعد از اخذ رضایت نامه از بیماران، استخراج DNA ژنومی از لوکوسیت های خون محیطی صورت گرفت. DNA های استخراج شده پس از حلقوی شدن (هضم شدن توسط BclI، سپس اتصال قطعات حاصل توسط آنزیم لیگاز)، به عنوان الگو برای تکثیر IS-PCR مورد استفاده قرار گرفتند.
در 30 بیمار هموفیلی A شدید، 40% بیماران وارونگی اینترون 22 نوع I و 6/6% بیماران وارونگی اینترون 22 نوع II داشتند.
نتایج این مطالعه نشان داد نوترکیبی بین اینترون (1-h22) در ژن فاکتور هشت و کپی های آن (2-h22، 3-h22) که در جهتی مخالف با اینترون 1-h22 قرار می گیرند به ترتیب سبب ایجاد وارونگی نوع II و نوع I می شود که وارونگی اینترون 22 نوع I از نوع II شایع تر است. همچنین با استفاده از IS-PCR به عنوان روشی کم هزینه می توان در زمان صرفه جویی و تشخیص مولکولی وارونگی را نیز ارتقا بخشید. این روش در ارزیابی ناقلین، افراد بیمار و تشخیص پیش از تولد در بیماری هموفیلی A نیز کاربرد دارد.