ارزیابی و مقایسه میزان ایمنی زایی پروتئین های نوترکیب زیر واحد اتصالی توکسین های اشریشیا کلی و بوتولینیوم تایپ

در میان عوامل باکتریایی، شایع ترین عامل بیماری اسهال، باکتری اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک است. زیر واحد LTB سم این باکتری قادر به ایجاد مصونیتی شش ماهه است. کلستریدیوم بوتولینوم نیز عامل بیماری کشنده بوتولیسم می باشد و زیر واحد BoNT/A-Hc سم آن می تواند تا دو سال در برابر این بیماری مصونیت ایجاد کند. میزان ایمنی زایی که هر یک از این زیر واحدهای نوترکیب ایجاد می کنند، می تواند از عواملی باشد که در به وجود آمدن مصونیتی با ماندگاری متفاوت تاثیرگذار باشد. هدف از این مطالعه بررسی و مقایسه میزان تولید آنتی بادی ناشی از استفاده از دو پروتئین LTB و BONT/A-Hc در موش آزمایشگاهی بود.
در این مطالعه تجربی از باکتری Bl21DE3 E. Coli تراریخت شده با وکتور pET28aاستفاده گردید. این وکتور حاوی ژن نوترکیب LTB اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک و ژن نوترکیب BONT/A-Hc بوتولینوم به طور جداگانه بود. پس از بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب LTB از فاز نامحلول و BoNT/A-Hc از فاز محلول عصاره سلولی، محصولات آن ها بر روی ژلSDS-PAGE بررسی گردید. موش های آزمایشگاهی به وسیله پروتئین های حاصل، ایمنی زایی شدند. تیتر آنتی بادی حاصل از هر دو نوع پروتئین نوترکیب با استفاده از آزمون آماری t-Test در نرم افزار SPSS ارزیابی و مورد مقایسه قرار گرفت.
پروتئین های نوترکیب بیان شده BoNT/A-Hc و LTB با ستون نیکل تخلیص شدند. پس از ایمنی زایی موش های آزمایشگاهی، تفاوت معناداری در تیتر آنتی بادی برای دو پروتئین BoNT/A-Hc و LTB مشاهده گردید (01/0>P).
اختلاف کمی بین تیتر آنتی بادی برای دو پروتئین BoNT/A-Hc و LTB مشاهده گردید که می تواند به دلیل خاصیت قوی ادجوانسیتی LTBو ایمنی زایی ایجاد شده تقریبا یکسان، در فاصله زمانی محدود باشد