جداسازی، شناسایی بیوشیمیایی و مولکولی باکتری های پروبیوتیکی از محصولات لبنی سنتی سبزوار

پروبیوتیک ها میکروارگانیسم های غیر پاتوژن و مفیدی هستند که شناسایی آنها در محصولات لبنی سنتی نه تنها می تواند منجر به جداسازی باکتری های پروبیوتیکی با خصوصیات ویژه شود، بلکه می تواند دیدگاه مناسبی برای تولید انبوه محصولات لبنی سنتی که به طور طبیعی حاوی باکتری های پروبیوتیکی هستند به ما عرضه کند. پس از نمونه برداری محصولات لبنی از مناطق مختلف شهرستان، کشت های متوالی بر روی محیط های اختصاصی MRS Broth و MRS انجام شد. شناسایی اولیه با رنگ آمیزی گرم، تست حرکت، تست احیای نیترات، رشد در دمای oC 15 و 45، رشد در 6/9pH= و همچنین قابلیت تخمیر 11 قند بررسی شد. جهت تعیین دقیق سویه مورد نظر، ژن 16S rDNA با جفت آغازگرهای اختصاصی توسط PCR تکثیر داده شد و تعیین توالی گردید. توالی های حاصل بعد از ویرایش، بلاست نوکلئوتیدی شدند. در پایان تست تحمل شرایط اسیدی و صفراوی نیز برای نمونه های مثبت مورد بررسی قرار گرفت. پس از انجام کشت های متوالی بر روی محیط های آگار اختصاصی، 16 سویه باکتری برای آنالیزهای بعدی انتخاب شدند. در شناسایی اولیه سویه ها توسط روش های فنوتیپی، 14 نمونه مثبت بودند که سپس برای شناسایی دقیق تر، ژن 16S rDNA تمام نمونه ها با PCR تکثیر داده شد. بعد از شناسایی مولکولی و تعیین توالی ژن 16S rDNA، بلاست توالی ها شباهت بالای نمونه ها با Lactobacillus plantarum را نشان داد. نتایج تحمل شرایط اسیدی و صفراوی نیز نشان داد که این باکتری ها بهترین رشد را در 4pH= دارا می باشند و سویه مورد نظر توانایی رشد در حضور نمک صفراوی را دارد. نتایج بیوشیمیایی نشان داد که سویه رایج در محصولات مورد بررسی لاکتوباسیلوس است که تست های مولکولی و تعیین توالی نیز وجود L. plantarum را در محصولات مورد نظر تایید نمود. همچنین تست تحمل شرایط اسیدی و صفراوی بعنوان مهمترین خصوصیت باکتری های پروبیوتیک نشان داد که سویه مورد نظر توانایی تحمل این شرایط را دارا می باشد.