تعیین محدوده تشخیصی سالمونلای مرده و زنده در شیر خام و استریلیزه با روش RT-PCR

هدف از انجام این مطالعه تعیین محدوده تشخیصی روش RT-PCR جهت تشخیص سالمونلای زنده و مرده در شیر خام و استریلیزه بود. در ابتدا میکروارگانیزم در محیط کشت TSB، شیر خام و شیر استریلیزه تلقیح و نمونه ها به دو بخش تقسیم شدند. در هر تیمار یکی از نمونه ها برای غیر فعال شدن باکتری مدت 10 دقیقه در دمای 80 درجه سانتیگراد حرارت داده شدند. از هر نمونه دو سری رقت سازی ده دهی تهیه و یکی مستقیما و دیگری بعد از 4 ساعت گرمخانه گذاری در دمای 37 درجه سانتیگراد مورد آزمایش PCR معمولی و RT-PCR قرار گرفتند. در نمونه های TSB، شیر خام و شیر استریلیزه حرارت داده شده و نشده غنی سازی شده یا نشده محدوده تشخیص باکتری ژن invA با روش PCR معمولی به ترتیب 100 × 5، 104 × 1 و 103 × 1 واحد تشکیل دهنده کلنی در میلی لیتر بود. حساسیت روش RT-PCR در نمونه های حرارت ندیده و غنی سازی شده نیز به ترتیب 100 × 5، 104 × 1 و 103 × 1 واحد تشکیل دهنده کلنی در میلی لیتر بود. با روش RT-PCR در هیچکدام از نمونه های حرارت دیده باکتری تشخیص داده نشد. نتایج این آزمایش یکی از کاربردهای مهم RT-PCR جهت شناسایی باکتری زنده از مرده و تعیین محدوده تشخیصی سالمونلا را در شیر مشخص نمود.