کلونینگ و توالی یابی پلاسمید کد کننده پروتئین گرانولی متراکم 14 سویه RH توکسوپلاسما گوندیی

بیماری توکسوپلاسموز از بیماری های شایع در جهان می باشد که حدود یک سوم مردم دارای آنتی بادی بر علیه توکسوپلاسما هستند. این بیماری بیشتر به دلیل عوارض وخیم آن، در موارد مادرزادی و نیز بیماران نقص سیستم ایمنی اهمیت دارد. ژن کد کننده پروتئین 14GRA می تواند به عنوان یک هدف مناسب جهت ساخت DNA (Deoxyribonucleic acid) واکسن و همچنین طراحی کیت تشخیصی مورد ارزیابی قرار گیرد. هدف از این بررسی، شناسایی و کلون کردن ژن کد کننده پروتئین 14GRA سویه RH توکسوپلاسما گوندیی بود.
در مرحله اول پس از جداسازی تاکی زوئیت های توکسوپلاسما از مایع صفاقی موش آلوده، DNA آن استخراج شد و پس از انجام PCR (Polymerase chain reaction)، محصول تکثیر شده بر روی ژل الکتروفورز بررسی گردید. سپس ژن حاصل در وکتور pTG19-T کلون گردید. جهت تایید از روش های Colony-PCR و هضم آنزیمی به وسیله آنزیم های محدود کننده HindIII و EcoRI استفاده شد. در نهایت ژن 14GRA کلون شده در وکتور pTG19-T مورد تعیین توالی قرار گرفت.
بررسی واکنش PCR بر روی ژل الکتروفورز و همچنین تعیین توالی ژن کد کننده پروتئین 14GRA نشان داد که این ژن 1227 جفت بازی با ژن 14GRA سویه RH ثبت شده در ژن بانک تشابه کامل داشت. علاوه بر این، با استفاده از روش های هضم آنزیمی و Colony PCR کلون شدن، ژن 14GRA در پلاسمید pTG19-T مورد تایید قرار گرفت.
ژن 14GRA به طور موفقیت آمیزی در پلاسمید pTG19-T کلون شد و این پلاسمید می تواند برای مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن DNA و طراحی کیت تشخیصی مورد استفاده قرار گیرد.