ساب کلونینگ قطعه تک زنجیره ای ناحیه متغیر آنتی بادی بر ضد گیرنده CD4 انسانی نشان دار با پروتئین فلورسنت سبز در پلاسمید pET26b

آنتی بادی ها ابزارهای قدرتمندی برای مطالعه ی عملکرد، مکان یابی و میان کنش پروتئین ها هستند. هم چنین این مولکولها به طور گسترده برای اهداف تشخیصی و درمانی نیز به کار می روند.آنتی بادی ها معمولا برای اهداف تحقیقاتی و تشخیصی با مولکولهای فلورسنت نشاندار می گردند. اگر مولکول فلورسنت مورد نظر یک پروتئین نوترکیب باشد در این حالت مولکول حاصله فلوبادی نامیده میشود. در مطالعه حاضر، قطعه تک زنجیرهای ناحیه متغیر یک آنتی بادی بر ضد گیرنده CD4 انسانی که به پروتئین فلورسنت سبز متصل شده است، توسط دو آنزیم IEcoR و NcoI از پلاسمید IpAB استخراج گردید. سپس قطعه مورد نظر به منظور افزایش بیان پروتئین در پلاسمید pET26b کلون شده و پلاسمید نوترکیب ایجاد شده در باکتری اشرشیا کلی ترانسفورم گردید. ورود قطعه مذکور به داخل پلاسمید pET26b به وسیله واکنش کلنی-PCR و هضم دوگانه تایید شد. هم چنین بیان فلوبادی نیز توسط روش دات بلات تایید گردید. فلوبادی نوترکیب حاضر یک آنتی بادی با عملکرد دوگانه بوده که به طور همزمان ویژگی اتصال به آنتی ژن و فلورسنت خود را حفظ کرده است. بنابراین انتخاب پلاسمید مناسب مانند pET26b برای تولید مقادیر زیاد این فلوبادی برای اهداف ما ضروری به نظر می رسد.