همسانه سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع B باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری E. coli

سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین های باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین ها دارای هفت سروتیپ از A – G می باشند. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجاد شده توسط BONT/B استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده ی ناحیه اتصالی آن می باشد. چون دارای اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی می باشد.
ابتدا سکانس ژن ناحیه اتصالی را از سایت NCBI گرفته شد. سپس پرایمرهای مناسب برای آن طراحی شد. سپس باکتری کشت داده شد و ژنوم آن استخراج شد. از PCR برای تکثیر ژن استفاده گردید. ژن در وکتور pGEM-Teasy وارد شد. بعدوکتور نوترکیب وارد باکتری E. coliDH5α گردید. سپس، زیرهمسانه سازی در باکتری E. coliBL21 با استفاده از وکتور بیانی pET28a(+) انجام شد.
واکنش های PCR، تعیین توالی و نتایج حاصل از آن توسط IPTG و بررسی بر روی SDS – PAGE و تائید به روش وسترن نشان دهنده صحت کلونینگ و بیان بود.
کلون و بیان این کاندید واکسن با موفقیت انجام شد و پتانسیل ایمنی زایی باید بررسی شود.