شناسایی سریع باکتری ویبریو کلرا با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه (Hexaplex PCR)

ویبریو کلرا (عامل بیماری وبا) یک پاتوژن مهم در بروز بیماری اسهال در بخش های گسترده ای از آسیا و آفریقا است. این باکتری یک پاتوژن روده ای است که می تواند سبب بروز بیماری همه گیر گردد. درنتیجه تشخیص سریع، حساس و اختصاصی ویبریو کلرا، مورد توجه اکثر آزمایشگاه های تشخیصی است. هدف از این پژوهش، طراحی و توسعه یک روش سنجش سریع ژنوم باکتری ویبریو کلرا بر اساس واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه (Hexaplex PCR) است. پرایمر جهت شناسایی شش ژن بیماری زا و تنظیمی از باکتری ویبریو کلرا انجام شد. ژن های مذکور شامل ژن های کلرا توکسین زیر واحدهای A و (ctxA، ctxB) B، توکسین zot، انتروتوکسین کلرا (ace)، توکسین تنظیمی (tcp) و پروتئین غشاء خارجی (ompW) است. ژنوم نمونه استاندارد، با استفاده از پرایمرهای مذکور در واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه، مورد مطالعه قرار گرفت. همچنین حساسیت و اختصاصیت سنجش مذکور نیز ارزیابی شد.
انجام PCR شش تایی، حضور ژن های بیماری زا و تنظیمی باکتری ویبریو کلرا را در نمونه استاندارد نشان داد. همچنین نتایج بیانگر اختصاصیت مناسب روش بوده و حساسیت آن تا حدود cfu 100 از باکتری محاسبه گردید.
از روش واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه می توان برای طراحی کیت تشخیصی عامل بیماری وبا استفاده نمود.