همسانه سازی و بیان ژن دومن a-1 آنتی ژن حفاظتی باسیلوس آنتراسیس در باکتری اشرشیا کلی

سیاه زخم (آنتراکس) یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری، باکتری باسیلوس آنتراسیس می باشد و آنتی بادی دومن a-1 آنتی ژن حفاظت کننده 62 (PA) درصد از آنتی ژن های مربوط به آنتی ژن حفاظت کننده (PA) را شناسایی می کند و بالاترین حضور اولیگو پپتیدهای آن در واکسن های AVP مشاهده شده است. در این مطالعه تجربی، توالی مورد نظر از پلاسمید pXOI با جایگاه های آنزیمی BamHI و XhoI تکثیر و در وکتور، همسانه سازی گردید و بعد از جداسازی به وکتور pET28a(+) زیرهمسانه سازی و به باکتری E. coli سویه (BL21(DE3 تراریخت (ترانسفورم) شد. بیان ژن دومن (a-1 (PA تحت القای IPTG انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتی ژن حاصل در چهار نوبت به موش های سوری تزریق شد. آنتی بادی پلی کلونال تولید شده در سرم موش ها اندازه گیری گردید. دومن (a-1 (PA کلون شده در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله PCR، آنالیز آنزیمی و توالی یابی تایید گردید. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن تایید شد. سپس آنتی بادی تولید شده از سرم موش جداسازی و توسط تست الایزا تایید گردید. هدف این مطالعه تولید آنتی ژن دومن a-1 آنتی ژن حفاظتی باسیلوس آنتراسیس در باکتری E. coli می باشد. با توجه به شناسایی آنتی ژن (PA) بوسیله آنتی بادی دومن a-1 و پایداری و حضور اولیگو پپتیدهای آن تا هفت سال و یا بیشتر در واکسن های AVP، می توان از آن به صورت مجزا، ترکیبی با سایر دومن های (PA)، و یا اجوان ها در طراحی واکسن برای بیماری سیاه-زخم استفاده نمود.