شناسایی مولکولی ژن فسفوگلیسرات کیناز از مواد دفعی- ترشحی انگل توکسوکارا کنیس

انگل توکسوکارا کنیس گسترش جهانی دارد و علت اصلی بیماری مشترکی بین انسان و دام است که توکسوکاریوز نامیده می شود. عفونت در انسان عمدتا در اطفال متعاقب بلع تصادفی تخم انگل جنین دار که در خاک وجود دارد و یا از طریق غذا و دست های آلوده اتفاق می افتد. در این پژوهش، آغازگرهای اختصاصی برای ژن کد کننده فسفوگلیسرات کیناز از انگل توکسوکارا کنیس با استفاده از (Expressed sequence tag) EST موجود در بانک ژن (با شماره دسترسی HO348231)، طراحی گردید و سپس با استفاده از تکنیک Semi-Nested RT-PCR آن قطعات ژنی تکثیر گردیدند. قطعه ی ژن کد کننده ی فسفوگلیسرات کیناز با موفقیت تکثیر و به منظور شناسایی ملکولی در پلاسمید pMALc2x همسانه سازی گردید. مجموع کل RNA از نمونه ها استخراج و سپس به منظور ساخت cDNA، از آن به عنوان رونوشت و از الیگو (dT) به عنوان آغازگر استفاده گردید. در ادامه پس از بهینه سازی شرایط PCR، قطعه ژنی به طول 304 نوکلئوتید تکثیر گردید و به منظور تسهیل در امر همسانه سازی محصول RT-PCR و وکتور pMAL، به وسیله ی آنزیم های محدودالاثر BamHI و HindIII هضم شده و سپس توسط آنزیم لیگاز به یکدیگر متصل شدند. پلاسمید نوترکیب به دست آمده جهت تکثیر به باکتری E.coli سوش BL21 منتقل و توالی آن بررسی گردید. توالی 304 نوکلئوتیدی به دست آمده قطعه ی پروتئینی حاوی 101 اسید آمینه با وزن ملکولی 10/497 کیلو دالتون و نقطه ی ایزو الکتریک 5 را کد می کند. مقایسه ی این ژن با ژن های مشابه از دیگر نماتودها، دامینی به نام «Phosphoglycerate kinase superfamily» را نشان داد. هم ترازی توالی به دست آمده نشان داد که این ژن با ژن فسفوگلیسرات کیناز از انگل Ascaris suum، 95 درصد مشابهت دارد. مشابه این ژن با نماتودی دیگر به نامBrugia malayi و هم چنین فیلاریایی به نام loa loa 85 درصد همخوانی دارد.