به کارگیری روش سریع و حساس Real time PCR در تشخیص ناخالصی های DNA در اینترفرون نوترکیب

اینترفرون ها خانواده ای از سایتوکاین ها هستند که در پاسخ ایمنی به عفونت های ویروسی نقش اساسی دارند. در جریان تولید اینترفرون نوترکیب در میزبان بیولوژیک، قطعاتی از اسیدنوکلئیک میزبان وارد محصول می شود. به علت وجود محدودیت های روش های قبلی در تشخیص این آلودگی ها، هدف از این مطالعه، استفاده از روش مولکولی سریع و حساس Real time PCR در این ناخالصی ها می باشد.
ابتدا با استخراج DNA از میزبان باکتریایی و تهیه رقت های متوالی از آن، واکنش Real time PCR به کمک رنگ SYBR Green I انجام گرفت و منحنی استاندارد رسم گردید. پس از استخراج DNA از اینترفرون و انجام واکنش PCR، میزان DNA به کمک منحنی استاندارد، تعیین گردید.
بررسی های انجام شده بر روی چند نمونه اینترفرون، میزان آلودگی DNA را حدود 0/02 پیکوگرم در هر دوز محصول نشان داد. همچنین پرایمرهای طراحی شده در واکنش فوق، هیچ گونه واکنشی با یکدیگر و سایر عوامل مداخله کننده نشان ندادند.
مطالعه فوق برای اولین بار در ایران بهینه سازی شد و نشان داد که تکنیک Real time PCR می تواند به عنوان یک روش کاربردی و بسیار دقیق در مراکز تولیدی جهت تشخیص ناخالصی های DNA ناشی از میزبان، در اینترفرون و سایر محصولات دارویی نوترکیب به کار برده شود.