بیان پروانسولین انسانی در گیاه با استفاده از ناقل (pVUT (Plasmid Viral University of Tehran

انسولین هورمون پروتئینی است که توسط سلول های بتای پانکراس ترشح می شود. به علت معایب تولید پروتئین های نوترکیب در میکروارگانیسم ها، هزینه به نسبت بالا، امکان آلودگی با پروتئین های سمی و مراحل هزینه بر خالص سازی، تولید پروتئین های نوترکیب در گیاهان امری قابل بررسی است. توسعه ی سیستم بیان گذرا بر پایه ی نوع حذف شده ی RNA-2 ویروس موزائیک لوبیا چشم بلبلی (Cowpea Mosaic Virus-Hyper Translatable یا CPMV-HT)، امکان تولید سریع و سطوح بالای پروتئین ها را بدون استفاده از همانندسازی ویروسی فراهم کرده است.
در این مطالعه، سازه های (pBI121-Proinsulin-Zera (pBI-ProZ در بر دارنده ی توالی ژن پروانسولین انسانی و Zera (دومین انتهای N غنی از پرولین گاما- زئین ذرت) و pCAMBIA1304-Proinsulin-Extensin (pCAMBIA-ProE) در بر دارنده ی سیستم بیانی CPMV-HT، به منظور بهبود ترجمه ی ژن پروانسولین انسانی و توالی سیگنال پپتید اکستنسین هویج ساخته شد. این دو سازه، به واسطه ی باکتری Agrobacterium tumefaciens pv. C58، به صورت بیان گذرا به گیاهان کاهو و یونجه انتقال داده شدند. تحلیل آماری این پژوهش بر پایه ی آزمایش فاکتوریل، در قالب طرح به کلی تصادفی بر روی غلظت پروانسولین تولیدی در هر گرم برگ تراریخت صورت گرفت. بیان ژن پروانسولین در بافت گیاهی تراریخت در سطح رونویسی، با استفاده از واکنش Reverse (transcription polymerase chain reaction (RT-PCR و در سطح ترجمه، با استفاده از آزمون لکه گذاری نقطه ای و (Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA مورد تایید قرار گرفت.
میزان پروانسولین فعال تولیدی با سازه های pCAMBIA-ProE و pBI-ProZ، در برگ های یونجه تراریخت، به ترتیب 82/6 و 32/4 نانوگرم در هر گرم برگ تر و در برگ های کاهوی تراریخت، به ترتیب 6/6 و 8/3 نانوگرم در هر گرم برگ تر بود.
طبق نتایج به دست آمده از این تحقیق، میزان بیان پروتئین پروانسولین در سازه ی pCAMBIA-ProE در بر دارنده ی خصوصیات سیستم بیانی CPMV-HT، بیشتر از سازه ی pBI-ProZ بود.