استفاده از روش Fast PCR جهت تشخیص گونه های فاسیولا

انگل های شایع کبدی فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا از عوامل ایجادکننده فاسیولایازیس بوده، که بیماری جهانی و شایع در انسان و دام می باشد. در مطالعه حاضر ما یک روش سریع، آسان و در عین حال دقیق را با استفاده از متد PCR Fast جهت تشخیص افتراقی گونه های فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا معرفی نمودیم.
30 ایزوله فاسیولای بالغ از کبد گاو و گوسفند از کشتارگاه های استان مازندران جدا گردید. ناحیه ژنی ITS1 با استفاده از پره میکس های Amp® Fast PCR، در مقایسه با یکی از پره میکس های متداول موجود در بازار (AccuPower® Taq PCR PreMix شرکت Bioneer) تکثیر شدند. به علاوه پروفایل PCR-RFLP جهت تشخیص افتراقی گونه های فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا با استفاده از آنزیم اندونوکلئازی TasI (Tsp509I) انجام گرفت.
باندی با وزن تقریبی 463 جفت باز برای تمامی نمونه های فاسیولا با استفاده از پره میکس Sapphire Amp® Fast PCR فقط ظرف مدت 34 دقیقه پس از تکثیر به دست آمد در حالی که تکثیر اسیدهای نوکلئیک با استفاده از پره میکس متداول پس از حدود 1 ساعت و 46 دقیقه کامل شد. تمامی محصولات با آنزیم محدودالاثر (Tsp509I TasI) مورد هضم قرار گرفت. پس از هضم در فاسیولا هپاتیکا دو باند 151 و 312 جفت باز و در فاسیولا ژیگانتیکا سه باند 93، 151 و 219 جفت باز تولید شد.
واکنش Fast PCR با استفاده از پره میکس Sapphire Amp® در کم تر از 3/ 1 زمان استفاده از سایر پره میکس های رایج کامل می شود. روش جدید Fast PCR با استفاده از پره میکس. Sapphire Amp® Fast PCR یک متد آسان، سریع و در عین حال دقیق بوده که جهت تعیین و تشخیص افتراقی گونه های فاسیولادر مطالعات اپیدمیولوژیک در انسان و دام های اهلی در مناطق اندمیک فاسیولیازیس کاربرد دارد.