جداسازی و شناسایی مایکوپلاسما آگالاکتیه(Mycoplasma agalactiae) با استفاده از دو روش کشت و واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR) از شیر گوسفندان منطقه ماسال(استان گیلان)

بیماری آگالاکسی واگیردار (Contagious agalactiae)، یک بیماری عفونی دامی در گوسفند و بز محسوب می شود که منجر به عفونت پستان، بیماری مفاصل زانو، کدورت قرنیه چشم و سقط جنین در دام می گردد. مایکوپلاسما آگالاکتیه مهمترین عامل این بیماری در گوسفند و بز می باشد. هدف از این تحقیق جداسازی و شناسایی مایکوپلاسما آگالاکتیه به کمک روش های تشخیصی کشت و PCR از شیر گوسفندان مشکوک به بیماری، در منطقه ماسال از توابع استان گیلان بود.
در این تحقیق از 5 گله گوسفندی که علائم ظاهری بیماری را داشتند، 25 نمونه از ترشحات پستان اخذ شد که پس از کشت در محیط PPLO broth، DNA با استفاده از کیت Roche استخراج و مورد آزمون PCR قرار گرفتند. آزمون PCR بر روی نمونه های استخراجی با استفاده از پرایمرهای اختصاصی با محصولاتی به طول bp270 در ژن 16S rRNA برای جنس مایکوپلاسما و 375bp در ژن لیپوپروتئین برای گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه انجام شد.
از مجموع 25 نمونه که ابتدا درمحیط Broth PPLO (جهت غنی سازی و رشد) و سپس در محیط Agar PPLO جهت رشد و تشکیل پرگنه کشت داده شدند، تعداد 9 نمونه(36درصد) با تشکیل پرگنه، مثبت تشخیص داده شدند. در آزمون PCR جنس مایکوپلاسما، 17 نمونه(68درصد) مثبت با باند مشخص bp270 و تعداد 5 نمونه(4/ 29درصد) با باند مشخصbp375 در آزمون PCR گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه، مثبت گزارش شدند. از مجموع 25 نمونه دریافتی تعداد 8 نمونه در دو روش کشت و PCR مثبت، تعداد 7 نمونه در هر دو روش منفی، تعداد 1 نمونه کشت مثبت و PCR منفی و تعداد 9 نمونه PCR مثبت و کشت منفی شدند.
نتایج حاصله نشان داد که PCRبعنوان روش جایگزین مطمئنی برای کشت، در جداسازی و شناسایی مایکوپلاسما اگالاکتیه قابل استفاده می باشد. مایکوپلاسما آگالاکتیه برای نخستین بار از موارد مشکوک به بیماری از شیر گوسفندان منطقه ماسال گیلان جداسازی شد که بعنوان مهمترین عامل آگالاکسی در این منطقه شناخته نشد.