همسانه سازی، امتزاج و بررسی بیان دومن -a1 آنتی ژن حفاظتی (PA20) باسیلوس آنتراسیس و N- ترمینال ipaD شیگلا در اشرشیا کلی

جنس شیگلا یکی از عوامل اصلی بیماری اسهال در انسان و باسیلوس آنتراسیس عامل سیاه زخم (یک بیماری مشترک بین انسان و دام) می باشد. یکی از مهم ترین فاکتورهای بیماریزایی شیگلا، پروتئین IpaD است. همسانه سازی N ترمینال ژن ipaD به همراه ژن pa20 که دارای نقش ایمنی زایی است، به عنوان کاندید واکسن نوترکیب می تواند مطرح باشد. در این مطالعه بیان ژن ممزوجی دومن -a1 آنتی ژن حفاظتی (PA20) باسیلوس آنتراسیس و N- ترمینال ipaD شیگلا در اشرشیاکلی بررسی شد.
در این مطالعه تجربی، طراحی پرایمر برای ژن pa20 صورت گرفت و جهت تکثیر این قطعه، واکنش PCR انجام شد. سپس قطعه تکثیرشده به درون pGEM-T Easy Vector Systems همسانه سازی شد. ژن pa20 به وسیله آنزیم های محدودالاثر EcoRI و XhoI برش خورده و در نهایت، ژن pa20 به ژن ipaD ممزوج شد. وکتور pET28a(+) حاوی کاست ژنی ipaD-pa20 ساخته شده به باکتری E. coli سویه BL21(DE3) تراریخت و بررسی بیان کاست ژنی انجام گرفت.
در این مطالعه، ژن های ممزوجی ipaD-pa20 در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله PCR و هضم آنزیمی تایید گردید. همچنین پروتئین نوترکیب تولیدشده به وسیله SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن تایید شد.
با توجه به شناسایی آنتی ژن PA به وسیله آنتی بادی PA20 و خاصیت القای آپاپتوز آن و خاصیت ایمنی زایی آنتی ژن ipaD تولیدشده، به عنوان کاندید واکسن نوترکیب علیه انواع شیگلا و باسیلوس آنتراسیس می تواند مطرح باشد.