جداسازی و کلونینگ ژن انسانی MAGEA4 در پلاسمید بیانی pRUF

کنسر تستیس آنتی ژن ها دست های از آنتی ژن ها می باشند که به طور ویژه بیان آن ها در سلول های زایا و انواع مختلفی از سرطان ها دیده شده است. یکی از اعضای این خانوادهMAGEA4 می باشد که این آنتی ژن با انواع تومورها در ارتباط است. از آنجا که عملکرد این ژن هنوز به درستی مشخص نشده است، هدف از این مطالعه تکثیر و کلونینگ این ژن در وکتور بیانی به منظور تولید پروتئین نوترکیب بیان کننده MAGEA4 است.
از طریقPCR و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی حاوی برش آنزیم محدود کننده ژن MAGEA4 تکثیر شد. محصول PCR خاص شده بین سایت های BamH1 وXho1 وکتور pTZ57/R قرار گرفت و در سویه Top10 اشرشیاکلی ترانسفورم گردید و توسط IPTG وX-Gal غربالگری شد. صحیح قرا گرفتن قطعه MAGEA4 توسط برش آنزیمی و تعیین توالی بررسی گردید. سپس ساب کلونینگ این ژن در وکتور بیانی pRUF با همان جایگاه های برش آنزیمی صورت پذیرفت.
تایید نهایی از طریق PCRکلنی و برش آنزیمی، تعیین توالی صورت گرفت. بنابراین ژنMAGEA4 در جایگاه برشی آنزیمی پلاسمید pRUF کلون شد.
مطالعه حاضر گام مهمی جهت تولید پروتئین نوترکیب و استفاده از آن جهت پی بردن به عملکرد این ژن و اهداف درمانی به منظور درمان سرطان می باشد.