لون سازی، بیان و تخلیص پروتئین اینتگراز ویروس HIV و بررسی آنتی ژنیسیته آن

ارتقاء روش های تشخیصی جهت شناسایی افراد آلوده به HIV، یکی از راه های مقابله با انتشار ویروس به شمار می رود. به دلیل بالابودن میزان موتاسیون در این ویروس، لازم است تا برای راه اندازی روش های ایمنواسی تشخیصی از پروتئین های محافظت شده، استفاده شود. به دلیل آنکه پروتئین اینتگراز یکی از محافظت شده ترین پروتئین های HIV است، آنتی ژن مناسبی برای این منظور به شمار می رود. در این مطالعه ضمن کلون سازی و تخلیص این پروتئین، ایمنوژنیسیته آن نیز مورد بررسی قرار گرفته است.
ژن اینتگراز در وکتور بیانی pET28a کلون گردید. پلاسمید نوترکیب حاصله به باکتری E.coli انتقال یافته و بیان پروتئین با استفاده از IPTG القاء شد. بررسی ایمنوژنیسیته پروتئین بیان شده با تکنیک وسترن بلات صورت گرفت. تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی میل ترکیبی با رزین های Ni-NTA انجام پذیرفت.
القاء باکتری های ترانسفرم شده با IPTG به بیان پروتئین اینتگراز منجر گردید و به این ترتیب پس از بهینه سازی شرایط بیان، حدود 40 درصد پروتئین های باکتریایی به پروتئین نوترکیب مورد نظر اختصاص پیدا کرد. انجام وسترن بلات نشان دهنده واکنش ایمنی اختصاصی با سرم افراد آلوده به HIV بود. به ازاء هر یک لیتر کشت باکتری، 75 میلی گرم اینتگراز تخلیص گردید.
پروتئین تولیدشده به واسطه حفظ خاصیت آنتی ژنیک خود، قابلیت به کارگیری در روش های تشخیصی ایمنواسی را دارد. با استفاده از بهینه سازی شرایط کشت و بیان پروتئین می توان به باکتری های نوترکیبی دست یافت که تولید پروتئین در آن ها با بازده بالایی صورت می پذیرد و بنابراین امکان استفاده از آن ها در اهداف صنعتی وجود خواهد داشت.