مهار موقت بیان ژن VEGFR2 با استفاده از siRNA اختصاصی در محیط کشت

استفاده از siRNA برای خاموش سازی بیان ژن ها امروزه در حال گسترش است. از جمله اهداف این تکنولوژی؛ جلوگیری از بیان عامل رشد اندوتلیال عروقی است. مطالعه حاضر به منظور جلوگیری بیان گیرنده تیپ II این عامل (VEGFR-2: Vascular Endothelial Growth Factor Receptor II) با استفاده از siRNAی اختصاصی در محیط کشت صورت گرفته است.
ابتدا با استفاده از توالی ژن هدف، توالی های siRNAی اختصاصی علیه آن طراحی؛ Blast و ساخته شد. از طرف دیگر cDNA سلول HUVEC سنتز و با کمک پرایمر اختصاصی و PCR به میزان موردنیاز تکثیر شد و سپس در وکتور بیانی PEFGP-N1 درج و تایید شد. پلاسمید ناقل حاصله با استفاده از لیپوفکتامین به سلول Hela که فاقد بیان ژن هدف بود انتقال داده شد. میزان بیان GFPدر وکتور اولیه و وکتور تراریخت شده در حضور و عدم حضور siRNA اختصاصی مورد ارزیابی قرار گرفت و میزان مهار ژن از طریق ارزیابی کاهش فلورسانس سبز رنگ ناشی از GFP و RT-PCR مورد بررسی قرار گرفت.
نتایج حاصل از دو siRNA به کار رفته بیانگر کاهش بیان ژن به ترتیب 56% و 62% در مقایسه با گروه کنترل بود (P<0.05).
siRNAی اختصاصی طراحی شده علیه VEGFR-2 با استفاده از لیپوفکتامین به طور مناسب به داخل سلول منتقل و از بیان گیرنده به طور معنی دار جلوگیری نمود. در واقع با قطع مسیر پیام رسانی رگزایی، می تواند از پیدایش عروق جدید جلوگیری نماید لذا احتمالا به عنوان یک عامل مناسب درمانی جدید در جلوگیری و یا کاهش رگزایی مطرح باشد.