جداسازی، تخلیص و بررسی خاصیت باکتری کشی کال پروتکتین از نوتروفیل های خون گاو

نوتروفیل های گاو پپتیدهای یاخته کشی تولید می کنند که باعث از بین بردن میکروارگانیسم های قارچی و باکتریایی از جمله عامل ماستیت می شوند.
استخراج و تخلیص پروتئین P7/P23 گاوی و بررسی فعالیت ضد باکتریایی آن علیه باکتری های Staphylococcus aureus، Aeromonas hydrophila و Yersinia ruckeri بود.
ابتدا یاخته های نوتروفیل گاو توسط روش رسوب دهی با دکستران و سانتریفیوژ روی فایکول از سایر یاخته های خون سالم جداسازی گردیدند. سپس زنده مانی آنها با کمک تریپان بلو تعیین و پس از خرد کردن آنها با سونیکاتور مقدار پروتیئن های تام سیتوزولی توسط سانتریفیوژ جداسازی شد. در مرحله بعد، پس از جداسازی به منظور تخلیص ابتدا دیالیز و سپس کروماتوگرافی تعویض یونی دو مرحله ای صورت گرفت. بررسی فعالیت ضد یاخته ای آن ، با روش های تعیین حداقل غلظت مهار کنندگی، حداقل غلظت کشندگی و آزمون انتشار در آگار بررسی شد.
یاخته های نوتروفیل با زنده مانی بیشتر از 95% جداسازی شدند. نتایج کروماتوگرافی و الکتروفورز ژل پروتئین نشان داد که پروتئین هترودیمر P7/P23 با موفقیت طی دو مرحله تخلیص شده است (مرحله اول حدود 60% و در مرحله دوم با خلوص بیشتر از 95%). وزن مولکولی هر کدام از منومرهای کوچک و بزرگ به ترتیب kDa 7 و 23 تعیین شد. پروتئین تخلیص شده دارای فعالیت باکتری کشی بوده و تاثیر آن بر یرسینیا روکری (μg/ml 64) بیش تر از دو باکتری دیگر بود.
نتیجه گیری نهایی: پروتئین تخلیص شده در طی فرایند تخلیص فعالیت خود را حفظ می کند. به علاوه فعالیت ضد باکتریایی نوتروفیل می تواند ناشی از پروتئین P7/P23 باشد.