جداسازی و تعیین توالی ژن چالکون سنتاز از گیاه استبرق (Calotropis procera)

چالکون سنتاز (CHS) آنزیم کلیدی در مسیر بیوسنتزی فلاونوئید می باشد و نخستین مرحله بیوسنتز فلاونوئیدها را کاتالیز می کند. هدف این تحقیق شناسایی ژن چالکون سنتاز در گیاه استبرق بود.
DNA ژنومی از برگ های تازه استخراج و به عنوان الگو جهت PCR استفاده شد. آغازگرها بر اساس نواحی حفاظت شده این ژن از سایر گیاهان طراحی شدند. فراورده حاصل از PCR تخلیص و توالی یابی شد. نتایج تعیین توالی ابتدا هم ردیف و سپس با توالی های برخی ژن های CHS موجود در بانک ژن و با نرم افزار DNAMAN مقایسه شد. درخت فیلوژنتیکی مربوط به توالی CHS در استبرق و گونه های گیاهی دیگر با نرم افزار MEGA 6 و به روش Neighbor-joining رسم شد.
نتایج PCR بیانگر وجود ژن چالکون سنتاز و تکثیر قطعه 572 نوکلئوتیدی متعلق به اگزون شماره2 این ژن بود. این با نام CpCHS و شماره بازیابی (KM878672) در بانک ژن ثبت شد. مقایسه توالی CpCHS با سایر توالی های ژن CHS نشان داد این ژن با توالی CHS درArabidopsis thaliana59 درصد، Nicotiana tabacum 63 درصد، Olea europaea 63 درصد و Petunia x hybrida 64 درصد یکسانی دارد. بیشترین یکسانی با توالی ژن CHS در Catharanthus roseus و برابر با 68 درصد بود. رسم درخت فیلوژنی نشان داد که CpCHS با ژن CHS گیاه Catharanthus roseus در یک شاخه قرار دارد.
این نتایج نشان می دهد که به احتمال CpCHS نیز همانند سایر ‍‍‍‍ژن های CHS در تنظیم مسیر بیوسنتزی فلاونوئیدها نقش دارد و شناسایی این ژن در گیاه استبرق منجر به یافتن راه کاری کارآمد جهت افزایش تولید مواد موثره دارویی و ارزشمند این گیاه باشد.