ارائه روشی نوین در تولید آنتی بادی اختصاصی با استفاده ترتیبی از پروتئین نوترکیب و پپتید (مدل PrIPeP)

بدست آوردن آنتی بادی اختصاصی با ایمن سازی توسط پروتئین نوترکیب و خالص سازی به کمک پپتید مصنوعی به عنوان روشی جدید (مدل PrIPeP ).
آنتی ژن پروتئینی با همسانه سازی ژن کامل SRY روی وکتورpET28a و بیان پروتئین نوترکیب آن در سویه Bl21 باکتری اشریشیاکلی تولید شد. پپتیدی اختصاصی از این پروتئین نیز طراحی و پس از سنتز برای ساخت ستون خالص سازی مورد استفاده قرار گرفت. پروتئین نوترکیب در ادجوانت فروند امولسیفای (emulsify) شد و طبق جدول زمانی استاندارد برای ایمن سازی در خرگوش مورد استفاده قرار گرفت. به عنوان شاهد، پپتید سنتز شده به پروتئین حامل KLH کنژوگه و مانند پروتئین نوترکیب برای ایمن سازی مورد استفاده قرار گرفت. برای بررسی نتایج، ابتدا صحت ایمن سازی به وسیله تکنیک الایزا مورد بررسی قرار گرفت. سپس آنتی سرم حاصل از تزریق پروتئین نوترکیب (Pro-antisera) با استفاده از ستون خالص سازی شامل پپتید کنژوگه به سفارز خالص سازی شد)مدل PrIPeP). آنتی سرم حاصل از تزریق پپتید کنژوگه به KLH (Pep-antisera) نیز با همین ستون خالص سازی شد. در نهایت، اختصاصیت و حساسیت آنتی بادی های خالص شده نسبت به پروتئین نوترکیب SRY و همچنین چند شاهد منفی (پروتئین نوترکیب HSFY، RBMY و RPS4Y) با استفاده از تکنیک وسترن بلات مورد بررسی قرار گرفت.
تیتراسیون (titration) با تکنیک الایزا نشان داد ایمن سازی برای هر 2 نوع آنتی ژن بخوبی و به طور اختصاصی انجام شد. همچنین آنالیز آنتی بادی های خالص کلاس IgG با تکنیک وسترن بلات نشان داد اختصاصیت و حساسیت آنتی بادی در هر دو گروه بالا است.
نشان دادیم که با استفاده از مدلPrIPeP می توان از یک سو به آنتی بادی های اختصاصی دست یافت که علیه ساختار طبیعی پروتئین تولید شده اند و از سوی دیگر از چالش های کنژوگاسیون پپتید به پروتئین حامل اجتناب کرد.