تاثیر پارامترهای مختلف فیزیکوشیمیایی تخمیر در تولید آنزیم های سلولیتیک خارج سلولی تولید شده توسط قارچ Trichoderma harzianum

این مطالعه برای یافتن شرایط بهینه پارامترهای فیزیکوشیمیایی تخمیر(به عنوان مثال pH، دما و مدت زمان انکوباسیون) برای تولید آنزیم سلولاز در قارچ Trichoderma harzianum انجام شده است. غلظت پروتئین های خارج سلولی با استفاده از روش اتصال رنگ بردفورد اندازه گیری شد. میزان فعالیت آنزیم های اندوگلوکاناز (EG)، اگزوگلوکاناز یا سلوبیوهیدرولاز (CBH)، بتا گلوکوزیداز و سلولاز کل اندازه گیری گردید. وزن مولکولی آنزیم های سلولاز تولیدی با استفاده از آزمون SDS-PAGE مورد مطالعه قرار گرفت. برای شناسایی اجزای کاتالیزوری غالب در شرایط بهینه تولید آنزیم، سلولازها توسط تکنیک الکتروفورز دوبعدی تفکیک شدند. شرایط بهینه تولید آنزیم سلولاز به شرح زیر مشخص شد: pH محیط برابر با 5/6، دمای انکوباسیون °C 28 و مدت زمان تخمیر 72 ساعت. پروفایل پروتئینی حاصل از آزمون SDS-PAGE چندین باند مربوط به آنزیم هایی مانند CBHs، EGs و BGLs را نشان داد. براساس این نتایج، قارچ T. harzianum دارای هر دو باند مربوط به آنزیم های (سلوبیوهیدرولاز)Cel7A و (اندوگلوکاناز) Cel7 می باشد. در نهایت، نتایج حاصل از تجزیه و تحلیل الکتروفورز دوبعدی پروتئین ها نشان داد که پروفایل پروتئینی در شرایط بهینه تولید آنزیم دارای باندهای پروتئینی متعددی متعلق به آنزیم هایی مانند سلوبیوهیدرولاز و اندوگلوکاناز است و در اثر هم افزایی سلوبیوهیدرولاز و اندوگلوکاناز میزان بالایی از فعالیت سلولازی در این قارچ قابل مشاهده است.