ایجاد جهش هدفدار در ژن IFNβ به منظور افزایش پایداری mRNA و سطح ترجمه آن با روش Megaprimer PCR
نویسنده:
چکیده:
زمینه و اهداف
پروتئین اینترفرون بتا (IFNβ) به عنوان یک داروی نوترکیب تولید شده و در درمان برخی بیماری ها مثل مالتیپل اسکلروزیس استفاده می شود. در سلول های یوکاریوتی mRNA IFNβ به سرعت تجزیه می شود و نیمه عمر آن بسیار کوتاه است. یکی از عواملی که باعث این امر می شود وجود توالی غنی از AU (ARE) در UTR 3 این mRNA می باشد. این ناحیه اثر مهاری بر ترجمه نیز دارد. هدف این تحقیق حذف ARE از ژن اینترفرون بتا جهت افزایش پایداریmRNA و سطح ترجمه می باشد. مواد و روش ها
به منظور حذف یک توالی 18 نوکلئوتید از ARE از روش Megaprimer PCR استفاده شد. محصول PCR با آنزیم های EcoRI و BglII برش داده شد. وکتور نیز توسط همین آنزیم ها اما به صورت نسبی برش داده شد. محصول برش یافته PCR خالص سازی شد و داخل وکتور کلون شد. در ادامه وکتور نوترکیب حاصل به رده سلولی CHO ترانسفکت شدند. یافته ها
محصول مرحله اول واکنش PCR حاوی جهش حذفی بود و به عنوان مگاپرایمر در واکنش دوم استفاده شد. هضم نسبی وکتور، قطعاتی با وزن های مختلف ایجاد کرد. قطعه مورد نظر ما از ژل استخراج و به عنوان وکتور کلونینگ استفاده شد. محصول نهایی PCR داخل وکتور کلون شد. صحت واکنش کلونینگ تایید شد و وکتور نوترکیب حاصل، به رده سلولی CHO ترانسفکت شد. نتیجه گیری
منطقه ای 18 نوکلئوتیدی از mRNA IFNβ حذف شد. اثر این میکروحذف بر پایداری mRNA و بازدهی ترجمه درآینده بررسی خواهد شد.کلیدواژگان:
زبان:
فارسی
انتشار در:
صفحات:
50 تا 57
لینک کوتاه:
magiran.com/p1566242
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یکساله به مبلغ 1,390,000ريال میتوانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
- حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران میشود.
- پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانههای چاپی و دیجیتال را به کاربر نمیدهد.
In order to view content subscription is required
Personal subscription
Subscribe magiran.com for 70 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!