کلونینگ و بیان ژن میکرونم 5 ایمریا نکاتریکس در اشرشیاکلی

آیمریا نکاتریکس عامل کوکسیدیوز حداکثر تأثیر اقتصادی را بر روی تولید پرندگان دارد. به نظر می رسد پروتئین های میکرونم نقش مهمی در حرکت انگل و تهاجم به سلول های میزبان دارد.
جداسازی و خالص سازی اووسیست آیمریا نکاتریکس از استان خوزستان-ایران بود. یک cDNA کد کننده پروتئین میکرونم 5 (EnMIC5) کلون و پس از بیان کردن این پروتئین نوترکیب، خاصیت ایمنی زایی آن توسط وسترن بلوتینگ مورد آزمایش قرار گرفت.
یک جفت پرایمر بر اساس توالی نوکلئوتیدی موجود برای ژن میکرونم 5 آیمریا نکاتریکس سویه LZ طراحی و به وسیله آن توالی بخشی از cDNA کد کننده این پروتئین به میزان bp 758 با استفاده از روش Semi- Nested RT-PCR تکثیر گردید سپس قطعه بدست آمده به درون وکتور pMAL-c2x حاوی پروتئین باند شونده به مالتوز کلون و در باکتری E . coli سویه TG1 بیان گردید. قطعه تکثیر شده، یک open reading frame 252 اسیدآمینه ای داشت که به میزان قابل توجهی حاوی مناطق حفاظت شده شامل پری کالکرئین پلاسمایی چسبنده و هفت جزء آبدوست بود.
در SDS-PAGE پروتئین الحاقی با وزن مولکولی در حدود 70 کیلو دالتون پس از القاء توسط IPTG بیان شد. آزمایش وسترن بلات نشان داد که پروتئین نوترکیب با سرم بدست آمده از جوجه های آلوده به آیمریا نکاتریکس واکنش می دهد.
نتیجه گیری نهایی: یافته ها نشان داد پروتئین بدست آمده قدرت ایمنی زایی نسبتا خوبی داشته و می تواند در آینده مورد مطالعه بیشتری قرار گیرد.