جداسازی و کلونینگ ژن ایزوفلاون سنتتاز از گیاه سویا رقم ویلیامز III

ایزوفلاونوییدها، دسته ای از ترکیبات فلاونوییدی هستند که با استفاده از آنزیم ایزوفلاون سنتاز از پیش ماده فلاوانونی در گیاهان لگوم تولید می شوند. مهم ترین ایزوفلاون های موجود در گیاه سویا شامل: جنیستین و دیدزین می باشند که خواص دارویی زیادی دارند. تحقیقات نشان می دهد که مصرف مرتب این ترکیبات خطر ابتلا به سرطان های وابسته به هورمون های جنسی را کاهش داده و کاهش علایم یائسگی، پوکی استخوان، تعدیل کلسترول خون، بهبود بیمای های کرونری قلبی و غیره همگی از مزایای استفاده از این ترکیبات می باشد. در این پژوهش به منظور جداسازی ژن 2- هیدروکسی ایزوفلاوانون سنتاز (IFS) ابتدا RNA کل از سویا جداسازی شده و کتاب خانه cDNA ساخته شد. ژن IFSبا پرایمرهای اختصاصی با مکان های برشی HindIII و XbaI از طریق PCR تکثیر گردید و سپس ژن تکثیر شده با اندازه 1566 جفت بازی پس از خالص سازی از روی ژل در مکان XbaI/HindIII در ناقل بیانی pET28a+ کلون شد. سپس پلاسمید نو ترکیب به استرینXLI-Blue باکتری E. coli منتقل گردید. وجود ژن IFS در پلاسمید های نوترکیب با دو روش PCR و هضم آنزیمی مورد تائید قرار گرفت. در نهایت، حامل مذکور را می توان برای بیان در داخل پروکاریوت یا با سابکلون کردن مجدد برای انتقال ژن به گیاهان مختلف با روش اگروباکتریوم و تفنگ ژنی مورد استفاده قرار داد.