بیان آنتی ژن HA1 ویروس آنفلوانزای پرندگان (H5N1) به عنوان کاندیدای مهم تولید واکسن در سیستم باکتریایی

پاندمی قریب الوقوع ویروس آنفلوانزا نیازمند واکسیناسیون جهانی است تا از بروز بیماری و مرگ و میر گسترده ممانعت به عمل آید، اما تولید واکسن های سنتی بر علیه این بیماری پروسه ای زمانگیر می باشد. در این تحقیق، سیستم باکتریایی به منظور بیان و تخلیص پروتئین هماگلوتنین با تاخوردگی مناسب، به عنوان پاسخی سریع در برابر استرین های عامل بروز پاندمی توسعه یافت. بنابراین دامین کروی هماگلوتنین نو ترکیب (HA1) ویروس آنفلوانزای H5N1 استرین (A/Indonesia/05/05) که پروتئینی سنتزی با طول 320-1 اسید آمینه است درون وکتور بیانی باکتریایی pET-28a تکثیر و کلون گردید. سپس پروتئین HA1 متصل به تگ هیستیدین در باکتری اشریشیا کولای سویه BL21 تحت القای IPTG با غلظت 1 میلی مولار بیان شد. بیان پروتئین با مطالعه مدت زمان های مختلف جهت القای IPTG بهینه سازی گردید و با کاربرد ستون نیکل مورد تخلیص قرار گرفت. وزن مولکولی پروتئین با استفاده از تکنیک وسترن بلات و کاربرد آنتی بادی مونوکلونال بر علیه تگ هیستیدین 40 کیلو دالتون تخمین زده شد و وزن حاصله هیچ تفاوتی با وزن مولکولی محاسبه شده نشان نداد. از این نظر که اکثر سایت های آنتی ژنی در دامین HA1 پروتئین HA قرار دارند، استفاده از این دامین ویروس آنفلوانزا جهت تولید واکسن دارای اهمیت قابل توجهی است. قابلیت القای تولید آنتی بادی بر علیه HA1 بیان شده در سلول های باکتری همچنین توسط آنالیز الیزا مورد بررسی قرار گرفت. پس از پروسه ایمنی زایی خرگوش ها، HA1 الیگومریک توانست آنتی بادی های خنثی کننده قابل توجه و سطوح بالایی از پاسخ های ایمنی را القا نماید. نتایج این تحقیق پیشنهاد می کند که واکسن های مبتنی بر HA1 به طور موثری در سیستم های باکتریایی تولید می شوند و می توانند به آسانی در شرایط بروز پاندمی های ویروس آنفلوانزا مورد استفاده قرار گیرند.