جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی

فاکتور سلول بنیادی(SCF)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلول های بنیادی خونساز(HSCs) بازی می کند. هدف این مطالعه جداسازی، کلونینگ و بیان SCF در میزبان بیانیRosetta بود. Rosetta علاوه بر ویژگی های میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می رفت با فراهم کردن کدون های نادر پروتئین های یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد.
مطالعه انجام از نوع تجربی بود. RNA تام از سلول های Hela استخراج و به دنبال آن cDNA ساخته شد. توالی رمزکننده SCF ، به وسیله آغازگرهای اختصاصی جداسازی و تکثیر شد و با استفاده از وکتور بیانی pET-32a در E.coli TOP 10 همسانه سازی شد. سازه نوترکیب به وسیله PCR ، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. وکتور نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta تراریخت شد. بیان SCF نوترکیب در حضور IPTG القا شد. بیان فاکتور سلول بنیادی انسانی(hSCF) با SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی و تایید شد.
توالی رمزکننده SCF با موفقیت از سلول های Hela جداسازی و در وکتور بیانی pET-32a همسانه سازی و بیان پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta انجام شد.
در سیستم بیانی Rosetta ، امکان تولید پروتئین های یوکاریوتی با کدون های نادر مثل AGG ، AGA ، AUA ، CUA ، CCC و GGA وجود دارد بنابراین به میزان بالایی پروتئین فاکتور سلول بنیادی تولید می شود.