مطالعه ساختار ژن دفنسین (Def2) گیاه شنبلیله (Trogonella foenum-graecum) با استفاده از فرم DNA ژنومی و cDNA

دفنسین ها که جزء خانواده پپتیدی با وزن مولکولی پایین و غنی از سیستئین می باشند یک گروه غالب از پروتئین های عمل کننده غشایی را تشکیل می دهند. این پپتیدها در حفاظت از بذر گیاهان در برابر عفونت های پاتوژن های قارچی نقش مهمی ایفا می کنند. در این تحقیق ژن 2Def از گیاه شنبلیله (Trigonella foenum-graecum) شناسایی، همسانه سازی و تعیین توالی گردید. بدین منظور DNA ژنومی گیاه شنبلیله به روش CTAB استخراج و با استفاده از آغازگرهای اختصاصی MDeff و MDefr ژن 2Def تکثر شد. قطعه تکثیر شده به طول مورد انتظار 750 جفت باز در ناقل pJET1.2 همسانه سازی شد. سازه به دست آمده پس از تایید با الگوهای هضم آنزیمی و PCR به نام pJETME3 نام گذاری شد. جهت مطالعه ساختار این ژن، mRNA از جوانه ده روزه گیاه شنبلیله استخراج و cDNA آن سنتز شد. cDNA حاصل به طول مورد انتظار 219 جفت باز در ناقل pJET1.2 همسانه سازی و پس از تایید با استفاده از الگوی هضم آنزیمی و PCR به نام pJETME4 نام گذاری شده و جهت تعیین توالی مورد استفاده قرار گرفت. مقایسه توالی DNA ژنومی و cDNA این ژن نشان داد که ژن 2Def گیاه شنبلیله حاوی یک اینترون به طول 486 جفت باز و Open reading frame آن پپتیدی به طول 72 اسیدآمینه را کد می کند. مقایسه توالی اسیدآمینه ای به دست آمده از ژن 2Def از گیاه شنبلیله با توالی های مرتبط ثبت شده در بانک ژنی مورد مقایسه قرارگرفت و مشابهتی بین 98/6 تا 100 درصد را نشان داد. از این توالی ژنی و cDNA تایید شده مربوط به ژن Def2 می توان در مراحل تحقیقاتی بعدی جهت انتقال به گیاه کلزا به منظور افزایش مقاومت علیه بیماری های قارچی استفاده نمود.