پایش اثر نانوکورکومین روی سمیت سرب در رده سلولی Huh7-1x-ARE-luc

ژنوم انسان حاوی ژن‏های محافظت کننده است که دارای توالی عوامل پاسخ‏گو به آنتی اکسیدان‏ها در پروموترشان است که بیان آن‏ها به‏طور خاص تحت تاثیر عامل رونویسی Nrf2قرار می‏گیرد. این مسیر پیام رسانی (ARE\KEAP1) عمده‏ترین مکانیسم دفاعی در برابر استرس اکسیداتیو است. رده سلولی حاوی عوامل پاسخ‏گو به آنتی اکسیدان‏ها (ARE)، سلول‏های گزارشگر حساسی هستند که برای تشخیص عوامل فعال کننده پاسخ‏گو به آنتی اکسیدان‏ها به‏کار می‏روند و می‏توانند در شناسایی مواد اکسیداتیو همچون سرب کمک کننده باشند.
مواد و روش‏ها: در این مطالعه از رده سلولی پایدار Huh7-1x-ARE-luc تولید شده، استفاده شد. مهارفعالیتمتابولیکی سلول‏های Huh7 در غلظت‏های مختلف سرب (0 تا 80 میکرومولار) توسط آزمون MTT سنجیده شد. در ادامه رده سلولی Huh7-1x-ARE-luc برای بررسی آثار استرس اکسیداتیو با سرب به‏عنوان یک ترکیب القا کننده استرس اکسیداتیو و نانوکورکومین به‏عنوان یک آنتی اکسیدان در غلظت‏های متفاوتی از این ترکیبات تیمار شد و سپس میزان فعالیت لوسیفرازی زیست‏حسگر بررسی شد. همچنین میزان بیان ژن‏های مسیر ARE\KEAP1 توسط Real time PCR تعیین شد.
نتایج نشان می‏دهد که غلظت 30 میکرومولار سرب باعثمهار متابولیکی50درصدیسلول‏های Huh7 می‏شود. فعالیت لوسیفرازی سلول‏های تیمار شده با غلظت‏های 4 و 8 میکرومولار از نانوکورکومین و غلظت 30 میکرومولار از سرب نسبت به کنترل ( 30 میکرومولار سرب) کاهش یافته است و با افزایش غلظت نانوکورکومین به 16 میکرومولار این فعالیت افزایش می‏یابد. نتایج تحلیل داده های حاصل از Real time-PCR نشان می‏دهد که بیان تمامی ژن‏های مورد بررسی شامل Nrf2 و NQO1 در رده سلولی Huh7-1x-ARE-luc تیمار شده با سرب 30 میکرومولار و نانوکورکومین 4 و 8 میکرومولار نسبت به تیمار همان ژن‏ها با سرب 30 میکرومولار کاهش یافته است. از سوی دیگر؛ بیان این ژن‏ها در سلول‏های تیمار شده با سرب 30 میکرومولار و نانوکورکومین 16 میکرومولار نسبت به تیمار همان ژن‏ها با سرب 30 میکرومولار افزایش داشته است.
نتیجه گیری: نانوکورکومین به‏عنوان یک آنتی‏اکسیدان توانسته اثر سمیت سرب را احتمالا از طریق مسیر ARE\KEAP1 به‏طور معنی‏داری کاهش دهد؛ در نتیجه می‏تواند به‏عنوان یک آنتی‏اکسیدان در کاهش استرس اکسیداتیو استفاده شود.