زیرهمسانه سازی و بیان ژن SO6 گیاه غاسول صابونی در باکتری E.coli و بررسی تیترآنتی بادی آن در رت آزمایشگاهی

پروتئین های غیرفعال کننده گیاهی (RIP) به عنوان آنزیم های N-glycosidase عمل می کنند و به وسیله چندین عضو از خانواده Caryophyllaceae مانند Saponaria Officinalis تولید می شوند. ایزوفرم های مختلفی از RIPها به وسیلهSaponaria Officinalis بیان می شوند. ایزوفرم SO6، آدنین 4324 را در توالی حفاظت شده GAGA در چهار لوپ 28SrRNA را دپورینه کرده و سنتز پروتئین را مختل می کند. هدف این مطالعه بیان ایزوفرم SO6 در باکتری E.coli و بررسی تیترآنتی بادی آن در رت های آزمایشگاهی است.
در این مطالعه تجربی ژن SO6 سنتز شده از پلاسمید pUC57-SO6 نوترکیب به وسیله آنزیم های محدود کننده BamHI و SalI جدا و در وکتور بیانی pET28a(+) زیرهمسانه سازی شد. بیان پروتئین نوترکیب با IPTG القا گردید. پروتئین SO6 نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص گردید. به منظور تایید پروتئین نوترکیب western blotting انجام گرفت. رت ها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده واکسینه شدند و تیتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت.
واکنش PCR و هضم آنزیمی، زیرهمسانه سازی ژن SO6 را در وکتور بیانی pET28a(+) تائید کرد. یک باند پروتئینی 29.5kDa در SDS-PAGE بیان بالای پروتئین نوترکیب را نشان داد. آنتی بادی پلی کلونال، SO6 را شناسایی کرد. تست ELISA تیتر آنتی بادی قابل توجهی را بعد از تزریق پروتئین در گروه های تست در مقایسه با گروه های کنترل تائید کرد.
از آنجایی که آنتی ژن SO6 نوترکیب تخلیص شده ایمونوژن است، این آنتی ژن می تواند برای تحقیقات ضد سرطانی و کاندید واکسن استفاده شود.