طراحی، ساخت و بیان اپی توپ های پروتئین VP1 ویروس تب برفکی سروتیپO ایران

تب برفکی (FMD)، یک بیماری حاد بسیار مسری در حیوانات زوج سم است و باعث زیان های اقتصادی قابل توجه ای می شود. بنابراین، ساخت یک واکسن امن تر و کارآمد تر در برابر ویروس تب برفکی (FMDV) ضروری است. هدف از این مطالعه توسعه یک واکسن کاملا ایمن چند اپی توپی نوترکیب به جای واکسن های سنتی غیرفعال، در برابر ویروس (FMDV)تب برفکی O ایران بود. برای هم سانه سازی و بیان اپی توپ های نوترکیب ایمنی زا بر علیه ویروس تب برفکی، ژن پروتئین نوترکیب متشکل از ترکیبات مختلف اپی توپ های سلول های B و سلول های T از پروتئینVP1 کپسید ویرس FMD سنتز شد. قطعه 1155 جفت بازی ژن نوترکیب با روش PCR با استفاده از آغازگرهای اختصاصی تکثیر و محصول PCR خالص و در ناقل بیانی pET-32A کلون شد. بیان پروتئین نوترکیب، با استفاده از یک میلی مولار ایزوپروپیل -بتا-D-گالاکتوزید (IPTG) القا و تائید بیان پروتئین نوترکیب تولید شده با استفاده از الکتروفورز پروتئین SDSPAGE و دات بلاتینگ انجام گرفت. صحت کلونینگ ژن پروتئین نوترکیب چند اپی توپی با روش PCR و هضم آنزیمی و تعیین توالی تائید شد. تجزیه و تحلیل SDS-PAGE نشان داد که سیستم بیانی پروکاریوتی pET32a-RP تولید پروتئین نوترکیب هدف، با وزن مولکولی در حدود 60 کیلو دالتون کارایی دارد و پروتئین نوترکیب چند اپی توپ به صورت نامحلول بیان شد. نتایج نشان داد سیستم بیانی پروکاریوتی جهت تولید ساختارهای چند اپی توپی نوترکیب ایمنی زای ویروس تب برفکی موثر و می تواند به عنوان یک روش بالقوه برای سازه های پلی اپی توپ ها استفاده شوند.