بهینه سازی کدون ژن فاکتور سلول های بنیادی (SCF) و ارزیابی بیان این ژن با کمک وکتور pBudCE4.1 در سلول های تخمدان همستر چینی (CHO)

فاکتور سلول بنیادی (SCF) یک سایتوکاین خونی است که می تواند از طریق تاثیر بر روی سلول های مولد خون ساز در تمایز سلول های پیش ساز خونی، بقاء، تکثیر و تمایز ماست سل ها و همچنین افزایش تکثیر و تهاجم سلول های توموری بااهمیت باشد و نقش درمانی آن در بهبود بیماری هایی نظیر آلزایمر و سکته های قلبی در حال بررسی و تحقیق است. هدف از این تحقیق کلون سازی ژن SCF به وسیله حامل بیانی pBudCE4.1 با بهینه سازی کدون در سلول های تخمدان همستر چینی (CHO) بود.
در این مطالعه تجربی توالی SCF بعد از بهینه سازی کدون برای سلول های CHO و تغییر دادن محتوی G+C به میزان بهینه به صورت سنتتیک ساخته شد و در وکتور بیانی pBudCE4.1 ساب کلون شد. سپس ژن SCF به همراه پلاسمید موردنظر به درون سلول های CHO-K1 ترانسفکت شد و با استفاده از RT qPCR میزان بیان ارزیابی گردید.
حامل بیانی نوترکیب pBudCE4.1/SCF ساخته شد و با تکنیک PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی مورد تائید قرار گرفت. نتایج RT qPCR نشان داد که ژن SCF پس از بهینه سازی کدون در سلول های CHO می تواند بیان شود.
نتایج نشان داد که به خوبی می توان نسبت به همسانه سازی ژن SCF از طریق حامل بیانی pBudCE4.1 اقدام کرد و این حامل بیانی می تواند یک حامل مناسب برای بیان ژن SCF در سلول های CHO باشد.