همسانه سازی و بیان ژن نوترکیب CD40L انسانی در رده سلولی HEK293

CD40L ، پروتئینی غشایی و یکی از اعضای خانواده TNF است که نقش مهمی در انتقال پیام سلولی در ایمنی ذاتی و تطبیقی دارد. از آن جایی که این پروتئین نقش خود را از طریق تجمع گیرنده در سطح سلول هدف ایفا می کند، به نظر می رسد فرم مالتی مری آن بتواند اثر قوی تری نسبت به فرم طبیعی ترایمری ایجاد کند. بر این اساس در این مطالعه کلونینگ و بیان فرم کایمری و دودکامری CD40L محلول، از طریق پروتئین خود مالتی مر شونده سورفاکتانت پروتئین (SP-D) D، در رده سلولی HEK293 مورد بررسی قرار گرفت.
مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. پروتئین SPD-CD40L به صورت in silico طراحی و در پلاسمید pcDNA3.1(+) همسانه سازی شد. سلول های HEK293 به عنوان میزبان بیانی مورد استفاده قرار گرفته و ترانسفکت شدند. بیان CD40L نوترکیب در سطح RNA به وسیله RT-PCR بررسی شد. پس از تخلیص پروتئین نوترکیب با روش کروماتوگرافی تمایلی، وزن مولکولی آن توسط SDS-PAGE تعیین گردید. به منظور بررسی اختصاصیت پروتئین نیز از روش های ELISA وDot Blot استفاده شد.
نتایج به دست آمده نشان دهنده ترانسفکشن سلول های HEK293 و بیان پروتئین نوترکیب پس از 24 و 48 ساعت از زمان ترانسفکشن بود. هم چنین نتایج حاصل از روش ELISA و Dot Blot بیانگر اختصاصیت پروتئین کایمری SPD-CD40L بود.
پروتئین کایمری SPD-CD40L از طریق وکتور بیانی pcDNA3.1(+) در رده سلولی یوکاریوتی HEK293 به طور موفقیت آمیز بیان شد و وزن مولکولی پروتئین 4-ترایمری(دودکامری) با مقدار مورد انتظار تطابق داشت.