همسانه سازی، بیان و ارزیابی عملکرد پروتئین شبه الاستین: پروتئین نوین در مهندسی پزشکی

پروتئین شبه الاستین یا ELP یک پلیمر زیستی مصنوعی شامل توالی های تکراری از پنتا پپتید VPGXG (X می تواند هر اسیدآمینه به غیر از پرولین باشد) است. این پروتئین یک پلی پپتید واکنشگر دمایی است که دارای یک فاز انتقالی برگشت پذیر است. در دمای زیر دمای انتقالی (Tt)، مولکول ELP به شکل فضایی باز شده درآمده و بنابراین در محلول های آبی به صورت محلول در می آید؛ اما وقتی دما به بالاتر از Tt تغییر و افزایش می یابد، ELP به صورت غیر محلول و شبه آگریگه از محلول خارج می شود. هدف مطالعه اخیر، همسانه سازی، بیان و ارزیابی فعالیت ELP60 بر مبنای Tt است.
ابتدا ELP10 (150 بازی) سنتز و درون پلاسمید pBluescript همسانه سازی شد. سپس ELP60 (900 بازی) با استفاده از روش الحاق تکراری هدایت شونده (RDL) تولید شد. در نهایت ELP60 درون پلاسمید pET25 تغییر یافته زیر همسانه سازی شد و بیان ELP60 با استفاده از روش SDS-PAGE تایید گردید. همچنین پروتئین ELP60 بر مبنای Tt و انجام چرخه انتقالی معکوس (ITC) که بیانگر فعالیت ELP60 است، تخلیص گردید.
نتایج نشان داد سازه بیانی pET-ELP60 تولید شد و بیان و تخلیص موفقیت آمیز ELP60 (در حدود 90%) در یک مرحله و بدون نیاز به ستون کروماتوگرافی صورت گرفت.
از پروتئین نوترکیب تولیدی می توان در زمینه خالص سازی ساده و سریع پروتئین های دارویی نوترکیب، دارورسانی هوشمند و مهندسی بافت استفاده نمود.