روشی ساده برای تخلیص ساب کلاس IgG2a موشی با کمک کروماتوگرافی تعویض یونی و افینیتی کروماتوگرافی

هدف از این مطالعه تخلیص ساب کلاس IgG2a موش می باشد محصولی که برای ایمونیزاسیون حیوانات دیگر جهت تولید هیبریدوماها در پروسه تولید آنتی بادی های مونو کلونال و تولید آنتی بادی های پلی کلونال به کار می رود.
در قدم نخست کروماتوگرافی تعویض یونی (Ion exchange chromatography) برای تخلیص IgG موش و در مرحله بعد افینیتی کروماتوگرافی با پروتئین ProA) A) برای تخلیص ساب کلاس IgG2a موش به کار برده شد. بعد از هر مرحله تخلیص روش الکتروفورز SDS-PAGE برای تایید خالص سازی به کار رفت. در مرحله آخر تایید ساب کلاس آنتی بادی خالص شده با کمک کیت تعیین ایزوتایپ صورت گرفت.
رسوب ایمونوگلوبولین های موشی با غلظت mg/ml 27 به مقدار 3 سی سی روی ستون افینیتی کروماتوگرافی Ion exchange برده شد. مقدار محصول IgG از ستون تعویض یونی Ion exchange) ) 28 میلی گرم و مقدار محصول IgG2a ستون ProA، 8 میلی گرم بود. در نتایج الکتروفورز SDS-PAGE در حالت احیا دو باند در موقعیت وزن مولکولی 25 و 50 کیلودالتون( KDa) مشاهده شد. تعیین ایزوتایپ محصول به دست آمده وجود IgG2a با زنجیره سبک کاپا را تایید کرد.
در این مطالعه محصول IgG2a با خلوص بالای 95% به دست آمد. خلوص بالای محصول به دست آمده نشان می دهد که کروماتوگرافی تعویض یونی و به دنبال آن کروماتوگرافی با ProA روش مناسبی برای تخلیص ساب کلاسهای IgG موش با کیفیت و خلوص بالا می باشد. تولید این محصول مناسب و اقتصادی با درجه خلوص بالا قدمی به سوی اسقلال کشور است.