بیان و تخلیص پروتئین کایمر نوترکیب دربردارنده CtxB و TcpA از ویبریوکلرا و بررسی تیتر آنتی بادی در موش

عامل کلونیزاسیون پیلی tcpAو توکسین کلرا مهم ترین عوامل بیماری زایی ویبریو کلرا هستند و توانایی تحریک سیستم ایمنی را دارند. هدف از این تحقیق بررسی بیوانفورماتیکی، بیان پروتئین کایمر نوترکیب CTXB-TCPA در باکتری اشریشیا کلی و تولید آنتی بادی علیه آن در موش بود.
کاست ژنی دربردارنده ژن های ctxB، tcpAو فاصله انداز با روش بیوانفورماتیکی طراحی شد. شاخصه هایی از قبیل ساختار پروتئین کایمر و اپی توپ ها بررسی شد. برای ساخت کاست ژنی، ژن های ctxBو tcpAتکثیر و در ناقل pET28a همسانه سازی شدند. بیان ژن های ctxB-tcpAدر pET28a(+) تحت القای IPTG انجام شد. پروتئین نوترکیب CTXB-TCPA به روش SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن تایید شد. تیتر آنتی بادی تولید شده در سرم موش با روش الایزا بررسی شد.
شاخص انطباق پذیری در ژن بهینه سازی شده به 9/0 تغییر کرد. با بهینه سازی ژنی درصد کدون های با ترجیح بالا به 74 درصد افزایش یافت. تحلیل آنزیمی همسانه سازی کایمر ژنی ctxB-tcpA در ناقل بیانی pET28a(+) را تایید کرد. پروتئینی با وزن مولکولی 35 کیلو دالتون در SDS-PAGE دیده شد. واکنش پروتئین با آنتی بادی ضد سم کلرا در وسترن بلات تایید شد. میزان پروتئین خالص شده 1/33 میلی گرم در لیتر بود. ایمن سازی موش ها پاسخ آنتی بادی سرمی را القا کرد.
پروتئین کایمر می تواند برای بررسی های ایمنی علیه وبا در نظر گرفته شود.