بررسی بیان ژن lnT هلیکوباکتر پیلوری در سلول های HDF انسان به روش RT-PCR

هلیکوباکتر پیلوری، باکتری مارپیچی شکل و گرم منفی است که موجب بیماری های معده و دوازدهه در انسان می شود. به دلیل وجود ایراداتی در درمان های آنتی بیوتیکی، تلاش های رو به افزایشی در جهت تولید واکسن موثر برای این عفونت صورت گرفته است. هدف از این تحقیق، ساخت سازواره ژنی حامل قطعه ژن lnT و بررسی بیان آن در سلول های انسانی به روش RT-PCR است.
در این مطالعه آزمایشگاهی، ژن lnT از ژنوم هلیکوباکتر پیلوری به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction) جدا شد. همسانه سازی محصولات PCR به روش کلون سازی T/A در وکتور T مناسب، انجام شد. سپس ژن lnT در وکتور بیانی یوکاریوتی pEGFP-C2 ساب کلون گردید. جهت بررسی بیان ژن lnT، سازواره pEGFP-C2-lnT به روش الکتروپوریشن به سلول های فیبروبلاست پوست انسان منتقل و بیان آن به روش RT-PCR بررسی شد.
انجام PCR منجر به تکثیر قطعه 1290 جفت بازی مربوط به ژن lnT گردید. این ژن با موفقیت در وکتور pTZ همسانه سازی شد و نتایج هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد ژن lnT در وکتور بیانی ساب کلون گردیده و سازواره نهایی pEGFP-C2-lnT ایجاد شده است. بررسی بیان این ژن به روش RT-PCR، تشکیل باند اختصاصی این ژن را نشان داد.
ژن lnT همسانه سازی شده در وکتور بیانی یوکاریوتی pEGFP-C2، توان تولید محصول اختصاصی این ژن در سلول های یوکاریوتی را دارد. لذا به نظر می رسد این سازواره ژنی، از پتانسیل لازم برای بررسی ایمنی زایی در مدل حیوانی به عنوان واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری برخوردار باشد.