تولید فاژهای پلی کلونال حاوی قطعات ژنی آنتی بادی اختصاصی باکتری Xanthomonas citri subsp. citri با استفاده از فن آوری نمایش فاژی

شانکر باکتریایی مرکبات از بیماری های باغات لیمو در جنوب کشور با عامل Xanthomonas citri subsp. citriمی‏باشد. تکنیک فاژنمایی از راهکارهای تولید آنتی‏بادی های اختصاصی به منظور شناسایی گیاهان آلوده و همچنین تولید گیاهان مقاوم به بیماری است. در این تحقیق قابلیت استفاده از این سیستم برای تولید فاژهای نوترکیب حاوی قطعات آنتی‏بادی اختصاصی برعلیه باکتری عامل بیماری شانکر مرکبات بررسی شد. برای این منظور، پروتئین‏ تاثیرکننده (pthA) و پیلوس (HrpE) که از اجزای اساسی سیستم ترشحی نوع سه باکتری هستند و نقش ضروری در بیماری‏زایی پاتوژن دارند، به عنوان آنتی‏ژن انتخاب شدند. ابتدا پروتئین‏های pthA و HrpE به صورت نوترکیب در میزبان باکتریایی تولید شدند و با روش کروموتوگرافی خالص گردیدند. از کتابخانه های فاژی حاوی قطعات ژنی نواحی متغیر آنتی‏بادی برای جداسازی فاژهای اختصاصی استفاده شد. غنی‏سازی جمعیت فاژهای اختصاصی با انجام سه مرحله غربالگری بر علیه پروتئین های خالص شده pthA و HrpEانجام شد و اختصاصیت فاژهای حاصله بر علیه آنتی‏ژن توسط آزمون الیزا بررسی شد. فاژهای نوترکیب قابلیت اتصال به پروتئین های pthA و HrpE را داشته و قادر به ردیابی گیاهان آلوده به بیماری شانکر باکتریایی مرکبات نیز بودند. از فاژهای جداسازی شده می‏توان به منظور تولید آنتی‏بادی اختصاصی مونوکلونال استفاده نمود.